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实验报告

：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定

：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介：

人脉络膜微血管内皮分离自眼球脉络膜组织；脉络膜在视网膜和巩膜之间，含有丰富血管和色素细胞，对外力冲击的耐受性较视网膜差
，当眼球受到从前面来的外力的冲击作用通过玻璃体传到后极部时，坚硬的巩膜在其外面又有抵抗作用
，使脉络膜在内外两种作用夹攻下而发生破裂和出血
。脉络膜呈暗褐色
，围绕视神经乳头部有照膜
，为青绿色带金属光泽的三角形区
。脉络膜是眼球中膜的后2/3处的薄膜
，由纤维组织、小血管和毛细血管组成，软而薄，棕红色，在巩膜和视网膜之间，续连于睫状体后方

。脉络膜的血循环营养视网膜外层，其含有的丰富色素起遮光暗房作用。主要功能是营养视网膜外层及玻璃体
，并有遮光作用

，使反射的物象清楚。同时对视觉系统起保护作用
，对整个视觉神经有调节作用
。续连于睫状体后方，含丰富的血管和色素细胞，有营养和遮光作用。

方法简介：

公司实验室分离的人脉络膜微血管内皮采用胶原酶-混合消化法结合密度梯度离心法
、后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人脉络膜微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞

，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

兔子神经营养因子4(-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子神经营养因子3(-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子神经特异性烯醇化酶(NSE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子神经生长因子(NGF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠白血病抑制因子(LIF)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat heat shock protein 20 (HSP-20) ELISA Kit 大鼠热休克蛋白20(HSP-20)试剂盒

Humanglucokinaseregulatoryprotein,GKRPELISAKit 人葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanC-typenaiureticpeptide,CNP试剂盒人C型尿肽(CNP)试剂盒规格
：96T/48T

植物组织质膜(plasmamembrane)分离试剂盒20次

Humansolubletumornecrosisfactor-relatedapoptosisinducingligand,sAILELISAKit人可溶性坏死因子相关凋亡诱导配体(sAIL)试剂盒规格：96T/48T

ROR1重组人 ROR1 蛋白 (aa 453-783, His & GST 标签) Protein

solute carrier family 1 溶质携带物家族-1(抗原 0.5mgsolute carrier family 1 溶质携带物家族-1(抗原)

SPP1重组人 Osteopontin / SPP1 / ETA-1 蛋白 Protein

GALNT10 Protein Human 重组人 GALNT10 / GalNAc-T10 蛋白

PDCD1LG2 Protein Human 重组人 B7-DC / PD-L2 / CD273 蛋白 (His & Fc 标签)

solute carrier family 1 溶质携带物家族-1(抗原 0.5mgsolute carrier family 1 溶质携带物家族-1(抗原)

GALNT10 Protein Human 重组人 GALNT10 / GalNAc-T10 蛋白

ROR1重组人 ROR1 蛋白 (aa 453-783, His & GST 标签) Protein

PDCD1LG2 Protein Human 重组人 B7-DC / PD-L2 / CD273 蛋白 (His & Fc 标签)

SPP1重组人 Osteopontin / SPP1 / ETA-1 蛋白 Protein

人脉络膜微血管内皮细胞大鼠纤维蛋白肽B(FPB)试剂盒 ，英文名： FPB ELISA Kit

Mouse chorionic gonadoopin (CG) ELISA Kit 小鼠绒毛膜(CG)试剂盒

Mousemaixmetalloproteinase5,MMP-5ELISAKit 小鼠基质金属蛋白酶5(MMP-5)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHuman2,3-dinohromboxaneB2,2,3-dinor-TXB2ELISAKit人2,3Dinor血栓烷B2

细胞HSV(HERPESSIMPLX)病毒定性试剂盒20次

ELISAKitEGF大鼠表皮生长因子