检测原理
犬瘟热病毒（CDV）ELISA检测试剂盒试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被犬瘟热病毒（CDV）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品 、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色 ，并在酸的作用下转化成zui终的黄色 。颜色的深浅和样品中的犬瘟热病毒（CDV）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值） ，判断样品是否含有犬瘟热病毒（CDV）。
样品收集、处理及保存方法
1.血清 ：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后 ，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物 。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎 。3000转离心10分钟取上清 。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装 ，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻 。
自备物品
酶标仪（450nm）
高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒温箱
操作注意事项
试剂盒保存在2-8℃ ，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象 ，水浴加热使结晶*溶解后再使用 。
实验中不用的板条应立即放回自封袋中 ，密封（低温干燥）保存。
预处理后的样本无需稀释 ，直接取50μL加样即可。
严格按照说明书中标明的时间 、加液量及顺序进行温育操作。
所有液体组分使用前充分摇匀 。
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释 ：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水 。
洗板方法
手工洗板：甩尽孔内液体 ，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
自动洗板机：每孔注入洗液350μL ，浸泡1min，洗板5次 。
犬瘟热病毒（CDV）ELISA检测试剂盒操作步骤
从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
设置阴、阳性对照孔和样本孔 ，阴、阳性对照孔中加入阴性对照 、阳性对照各50μL；
待测样本孔先加待测样本10μL ，再加样本稀释液40μL；
随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗原100μL ，用封板膜封住反应孔 ，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
弃去液体，吸水纸上拍干 ，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
每孔加入底物A 、B各50μL，37℃避光孵育15min 。
每孔加入终止液50μL ，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
1.试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00 ；
阴性对照孔OD值平均值≤0.2 。
2.临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.2
3.阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性
4.阳性判断 ：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性
试剂盒性能
1.准确性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；阴性对照孔OD值平均值≤0.15，说明试验结果有效。
2.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应 。
3.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
4.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
5.有效期：6个月
免责声明
1.犬瘟热病毒（CDV）ELISA检测试剂盒试剂盒仅供研究使用 ，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2.严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
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