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        Hcy Elisa 试剂盒常用的方法有哪几种?
        点击次数:649 更新时间:2022-07-27
          Hcy Elisa 试剂盒是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫分析技术 。酶联免疫吸附试验的标准程序 ,通常是把蛋白 、抗体 、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗体固定在固相载体上 ,再加入一级检测抗体,形成一个抗原抗体的复合物。如果该抗体已经用酶标记了,即可用来直接测定抗原的量,若无 ,则可利用另一个酶标记的二级抗体来测定抗原的量。测定抗原量的方法是加入该酶的底质,作用后产生出现的颜色深浅和样本中的抗原量呈正比的关系,依此原理计算出样本中的抗原总量或浓度 。
          1.直接法(direct ELISA)
          将抗原直接固定在固相载体上 ,加入酶标记的一级抗体,即可测定抗原总量 ,此一级抗体的特异性非常重要。
          优势:操作手续简短,因无须使用二抗可避免交互反应 。
          缺点:试验中的一抗都得用酶标记 ,但不是每种抗体都适合做标记 ,费用相对提高。
          2.间接法(indirect ELISA)
          此测定方法与直接法类似,差别在于一级抗体没有酶标记,改用酶标记的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。
          优势 :Hcy Elisa 试剂盒二抗可以加强信号 ,而且有多种选择能做不同的测定分析。不加酶标记的一级抗体则能保留它多的免疫反应性。
          缺点 :交互反应发生的机率较高。
          3.双抗体夹心法(sandwich ELISA)
          被检测的抗原包被在两个抗体之间 ,其中一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体。另一个则是检测抗体,此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量;或不标记,再透过酶标记的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体必须小心选取,才可避免交互反应或竞争相同的抗原结合部位。
          优势:高灵敏 、高专一性,抗原无须事先纯化 。
          缺点 :抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位 。
          4.竞争法(competitive ELISA)
          样本里的抗原(自由抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一起竞争相同的抗体,当样品里的自由抗原越多,就可以结合越多的抗体,而固定抗原就只能结合到较少的抗体,反之亦然。经清洗步骤,洗去自由抗原和抗体的复合物,只留下固定抗原和抗体的复合物,拿来与只有固定抗原的对照组结果相比较,根据呈色差异就可计算出样品里的抗原含量 。
          优势:可适用比较不纯的样本,而且数据再现性很高。
          缺点:Hcy Elisa 试剂盒整体的敏感性和专一性都较差。
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