为了更好的使用elisa试剂盒，接下来为大家说一下elisa试剂盒的提纯方法 ，希望以下介绍对大家有所帮助 。
IL-3 鸡白介素3酶联免疫试剂盒分光光度法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 试剂一：液体×1瓶 ，4℃保存。 试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存 。临用前加10mL蒸馏水溶解。 试剂三：粉剂×1瓶 ，4℃避光保存。临用前加入10mL试剂一，沸水溶解。试剂四 ：粉剂×1瓶，4℃保存 。临用前加50mL蒸馏水溶解 。试剂五：液体×1瓶，4℃保存。 标准品：液体×1支，0.25μmol/mL标准酪an酸溶液 ，4℃保存。自备仪器和用品： 可见分光光度计 、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪 、1mL玻璃比色皿、1.5mLEP管和蒸馏水 。产品说明 ： NP在一定的温度和中性pH条件下，催化水解蛋白质 。由于其安全无毒 、水解能力强、作用范围广等特点，中性蛋bai酶常用于食品、饲料、化妆品和营养保健品。 中性条件下 ，NP催化酪蛋白水解产生酪an酸；在碱性条件下，酪an酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝 ；在680nm有特征吸收峰 。
操作过程：
一、粗酶液提取 ：
1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织 ，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min ，取上清 ，即粗酶液。2.血清或培养液：直接测定。 3.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min） ；然后8000g ，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
二、测定操作： 1.分光光度计预热30min ，调节波长到680nm，蒸馏水调零。2.试剂二、试剂三和试剂四置于30℃水浴保温30min。 3.对照管 ：取一支EP管，加入100μL粗酶液，200μL试剂二，混匀后置于30℃水浴保温10min；加入200μL试剂三，混匀后8000g，4℃离心10min；取200μL上清液，加入新的EP管，再加入1000μL试剂四 ，200μL试剂五，混匀后置于30℃水浴保温20min，于680nm测定光吸收，记为A对照管 。 4.测定管：取一支EP管，加入100μL粗酶液，200μL试剂三，混匀后置于30℃水浴保温10min；加入200μL试剂二，混匀后8000g ，4℃离心10min；取200μL上清液 ，加入新的EP管 ，再加入1000μL试剂四，200μL试剂五，混匀后置于30℃水浴保温20min，于680nm测定光吸收 ，记为A测定管。（注意与空白管不同，先加试剂三，后加试剂二） 5.空白管：取EP管 ，加入200μL蒸馏水 ，1000μL试剂四，200μL试剂五 ，混匀后置于30℃水浴保温20min ，于680nm测定光吸收，记为A空白管。 6.标准管：取EP管 ，加入200μL标准品 ，1000μL试剂四，200μL试剂五 ，混匀后置于30℃水浴保温20min，于680nm测定光吸收 ，记为A标准管。注意：空白管和标准管只需要测定一次。
NP酶活性计算：
（1）按蛋白浓度计算 NP活性单位（U）定义 ：30℃每毫克蛋白每分钟水解产生1μmol酪an酸为一个酶活单位。NP活性（U/mgprot）=C标准品×△A测定÷△A标准×V1÷（Cpr×V2）÷T =0.125×△A测定÷△A标准÷Cpr
（2）按样本鲜重计算 NP活性单位（U）定义：30℃每克样品每分钟催化水解产生1μmol酪an酸为一个酶活单位。NP活性（U/g鲜重）=C标准品×△A测定÷△A标准×V1÷（W×V2÷V3）÷T =0.125×△A测定÷△A标准÷WC标准品 ：标准酪an酸溶液浓度 ，0.25μmol/mL；Cpr：粗酶液蛋白质浓度 ，mg/mL；W ：样品鲜重，g； V1：酶促反应总体积，0.1mL；V2 ：加入反应体系中粗酶液体积，20µL=2×10-2mL ；V3：粗酶液总体积，1mL ； T：催化反应时间，10min。 注意 ：若反应较弱 ，（A测定管－A对照管）差值较小 ，可适当延长反应时间（20-30min） ，即第一步水浴时间，最后计算酶活时对公式进行修改。