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实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

弹性软骨仅存在高等动物外耳廓
、听道、会咽等处。与其它软骨相比，间质中含有大量交织成网的弹性纤维
，成网状在软骨内排列，同时含有少量胶原纤维。目前，弹性软骨大多被用于修复人类残缺及畸形耳廓及其它美容修复

。

细胞特性：

1） 组织来源于实验动物的耳组织。

2) 细胞鉴定：Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ)荧光染色为阳性

。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%
。

4) 不含有 HIV-1、 HBV
、HCV、支原体
、、酵母和
。

5) 细胞生长方式
：梭状，不规则细胞，贴壁培养

推荐培养基：

242net必赢推荐使用 delf原代 上皮 细胞培养体系 作为该细胞的培养试剂。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)检测试剂盒 
，英文名： IDH1 ELISA Kit

Mouse leptin receptor (LR/Ob-R) ELISA Kit 小鼠苗条素受体(LR/Ob-R)检测试剂盒

MouseSolubleClusterofdiffereiation40ligand,sCD40LELISAKit 小鼠可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumandesmin,DesELISAKit人结蛋白

细胞Akt1/PKBa激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20/50/100

ELISAKitNF-κBp65大鼠核因子-κB亚基p65亲和肽

IL25重组大鼠 Interleukin 25 / IL25 / IL17E 蛋白 (Fc 标签) Protein

ERK(Extracellular signal-regulated kinase 0.5mgERK(Extracellular signal-regulated kinase) 原活化蛋白激酶抗原

FGFR4重组人 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 Protein

ENPP2 Protein Human 重组人 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白

CNTNAP2 Protein Mouse 重组小鼠 CNTNAP2 / CASPR2 蛋白

ERK(Extracellular signal-regulated kinase 0.5mgERK(Extracellular signal-regulated kinase) 原活化蛋白激酶抗原

ENPP2 Protein Human 重组人 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白

IL25重组大鼠 Interleukin 25 / IL25 / IL17E 蛋白 (Fc 标签) Protein

CNTNAP2 Protein Mouse 重组小鼠 CNTNAP2 / CASPR2 蛋白

FGFR4重组人 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 Protein

小鼠甲状腺球蛋白(TG)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat soluble cell differeiation aigen 14 (sCD14) ELISA Kit 大鼠可溶性白细胞分化抗原14(sCD14)检测试剂盒

Humaetinoicacidinduciblegene/RIG-likereceptor,RLR-9ELISAKit 人酸诱导基因/RIG-1样受体(RLR)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-fibrillarinaibody,AFA/snoRNP/U3RNP检测试剂盒人抗核仁纤维蛋白抗体(AFA/snoRNP/U3RNP)检测试剂盒规格
：96T/48T

植物精(arginine)含量化学比色法定量检测试剂盒20次

HumanVitaminD2，VD2ELISAKit人2(VD2)检测试剂盒规格：96T/48T

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，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽试剂盒、小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠超敏C反应蛋白检测试剂盒   小鼠超敏C反应蛋白试剂盒   规格型号
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：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名：小鼠超敏C反应蛋白试剂盒

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小鼠补体片断检测试剂盒   小鼠补体片断试剂盒   规格型号
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，规格型号
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小鼠补体蛋白检测试剂盒   小鼠补体蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠补体蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠补体蛋白试剂盒、小鼠补体蛋白eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。