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实验报告：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃

，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠牙周膜成纤维分离自牙周膜组织；牙周膜（牙周韧带
、牙周间隙）是由致密结缔组织所构成。多数纤维排列成束
，纤维的一端埋于牙骨质内，另一端则埋于牙槽窝骨壁里，使牙齿固位于牙槽窝内
；牙周膜内有神经
、血管
、淋巴和上皮细胞等
。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚
，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛
，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化

；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用
。刚分离的牙周膜成纤维细胞呈圆形

、折光性良好
，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团
；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大


，细胞质透明

，细胞核较大，呈椭圆形
，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。牙周膜成纤维细胞（PLFs）作为牙周膜的主体细胞，是牙周膜主要的间质细胞
，它不仅具有合成胶原、基质、弹力纤维和糖蛋白的功能

，还有吸收胶原吞噬异物的能力，还参与了牙周组织的病变、修复及再生过程
。现在

，利用牙周膜细胞建立体外模型，已经成为有关员研究牙周组织疾病的重要手段。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠牙周膜成纤维采用胶原酶-联合消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的小鼠牙周膜成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气
，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基

、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象

。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

小鼠胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠白介素10(IL-10)ELISAKIT   ELISA.   96T/48T

小鼠白介素11(IL-11)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

中文名称   方法   规格

小鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat secretory immunoglobulin A (sIgA) ELISA Kit 大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)试剂盒

HumanCholicacidELISAKit 人胆酸(Cholicacid)试剂盒 96T/48T 进口分装

rabbitTissue-typePlasiminogenActilyse,t-PA试剂盒兔子组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)试剂盒规格
：96T/48T

油类高效液相色谱法定量试剂盒20次

MouseIerferonγ,IFN-γELISAKitKit小鼠γ干扰素(IFN-γ)试剂盒规格：96T/48T

POSTN重组人 Periosestin / POSTN 蛋白 Protein

胰岛素样生长因子2(IGF2)重组蛋白 Recombinant Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2)

NA重组甲型流感 H5N1 神经酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) Protein

CD40 Protein Human 重组人 CD40 / TNFRSF5 蛋白

FLAA Protein M.viridifaciens 重组单核细胞增生李斯特菌 flagellin / flaA 蛋白

胰岛素样生长因子2(IGF2)重组蛋白 Recombinant Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2)

CD40 Protein Human 重组人 CD40 / TNFRSF5 蛋白

POSTN重组人 Periosestin / POSTN 蛋白 Protein

FLAA Protein M.viridifaciens 重组单核细胞增生李斯特菌 flagellin / flaA 蛋白

NA重组甲型流感 H5N1 神经酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) Protein

小鼠牙周膜成纤维细胞大鼠单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)试剂盒 ，英文名
： MCP-1 ELISA Kit

Porcine apolipoprotein B100 (apo-B100) ELISA Kit 猪载脂蛋白B100(apo-B100)试剂盒

ELISA 小鼠抗利尿激素/血管加压素(mouse AVP/ADH)  进口分装

CLIAKitforLPAb-IgA(HumanLegionellaaibodyIgA)ELISAKit人军团菌抗体IgA

通用型DNA克隆试剂盒(不包括内切酶)10次

ELISAKitIL-1鸡白介素1