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实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s

，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养

；二

、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介：

小鼠视网膜Muller分离自视网膜组织；视网膜居于眼球壁的内层，是一层透明的薄膜
。视网膜由色素上皮层和视网膜感觉层组成
，两层间在病理情况下可分开

，称为视网膜脱离。色素上皮层与脉络膜紧密相连，由色素上皮细胞组成
，它们具有支持和营养光感受器细胞、遮光
、散热以及再生和修复等作用

。组织学上视网膜分为10层
，由外向内分别为
：色素上皮层、视锥、视杆细胞层、外界膜、外颗粒层
、外丛状层、内颗粒层、内丛状层、神经节细胞层、神经纤维层、内界膜。视网膜内层为衬于血管膜内面的一层薄膜
，有感光作用
；后部鼻侧有一视神经乳头。视网膜上的感觉层是由三个神经元组成

。神经元是视细胞层
，专司感光

，它包括锥细胞和杆细胞。视杆细胞主要在离中心凹较远的视网膜上，而视锥细胞则在中心凹处多。层叫双节细胞，约有10到数百个视细胞通过双节细胞与一个神经节细胞相联系，负责联络作用
。第三层叫节细胞层

，专管传导
。视网膜是一层菲薄的但又非常复杂的结构，它贴于眼球的后壁部
，传递来自视网膜感受器冲动的神经纤维跨越视网膜表面，经由视神经到达出口。视网膜的分辨力是不均匀的
，在黄斑区，其分辨能力强
。视网膜Muller细胞作为视网膜中的主要胶质细胞
，大约占视网膜胶质细胞的90%
，因而在视网膜疾病中起着何种作用也受到越来越多的关注。在超微结构水平上
，Muller细胞的胞质似乎比临近的其他细胞更高的电子密度，更发达的内质网，细胞核是典型的卵圆形或多角形。但在不同物种中或同一物种中的不同部位，Muller细胞形态也会有所差异的
。视网膜Muller细胞是一种特化的神经胶质细胞，不仅具有维持视网膜的正常结构和功能的作用，并调制视网膜神经元活动
，还能参与多种病理过程
，尤其是眼底增殖性病变，如增生性玻璃体视网膜病变、增生性糖尿病视网膜病变等
，体外培养Muller细胞是研究这些增殖性病变途径之一。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠视网膜Muller采用胶原酶消化法和反复消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠视网膜Muller经GFAP免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体
、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%
；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态

、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象

。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

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：      进口分装

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小鼠血管紧张素II(mouse ANG II)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

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，英文名： D1R ELISA Kit

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