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① 组织块培养法

组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁
，使周边细胞能沿瓶壁向外生长
。

② 消化培养法

③ 悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞
、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化
，可采用低速离心分离
，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

④器官培养

器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养
，器官培养可保持器官组织的相对完整性
，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响
，以及局部环境的生物调节作用
。

产品名称：兔冠状动脉成纤维细胞

英文名称
：Rabbit Coronary Artery Fibroblast Cells

组织来源

：冠状动脉

产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

兔冠状动脉成纤维分离自冠状动脉组织

；冠状动脉是供给心脏血液的动脉，起于主动脉根部，分左右两支
，行于心脏表面。采用Schlesinger等的分类原则，将冠状动脉的分布分为三型：右优势型、均衡型
、左优势型

。左右冠状动脉是升主动脉的对分支
。左冠状动脉为一短干
，发自左主动脉窦
，经肺动脉起始部和左心耳之间
，沿冠状沟向左前方行后
，立即分为前室间支和旋支。前室间支沿前室间沟下行，旋支绕过心尖切迹至心的膈面与右冠状动脉的后室间支相吻合。它是构成冠状动脉壁的主要细胞成分
，细胞膜上分布着多种离子通道，如电压依赖性Na+通道、多种Ca2+通道和K+通道；它们参与了静息电位的维持与细胞膜电位的复极化
、超极化
，调节血管平滑肌的收缩及舒张功能，此外动脉粥样硬化的发展也涉及冠状动脉平滑肌细胞增殖、炎症及凋亡等。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动
，在一定条件下
，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的肺成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中
。30min细胞贴壁
，其中部分开始伸出伪足

，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形
，胞核清晰
，分布较均匀
，散在生长
，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密
，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明

，细胞核较大
，呈椭圆形，颜色淡
。细胞融合
，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布
。

实验室分离的兔冠状动脉成纤维采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的兔冠状动脉成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养基
：含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性

：可传2-3代左右；2代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

兔冠状动脉成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

取材→分离→培养和维持

1、取材

人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鲜和保鲜

② 应严格无菌

③ 防止机械损伤

④ 去除无用组织和避免干燥

⑤ 应注意组织类型、分化程度
、年龄等

⑥ 作好记录

2
、分离

人或动物体内(或胚胎组织)由于多种细胞结合紧密
，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，必须将现有的组织块充分散开，使细胞解离出来。

(1)悬浮细胞的分离方法

组织材料若来自血液
、羊水、胸水或腹水的悬液材料，的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。

(2)实体组织材料的分离方法

对于实体组织材料
，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散
，形成细胞悬液，可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。

① 机械分散法

特点:简便、快速,但对组织机械损伤大
，而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织
。

② 消化分离法

组织消化法是把组织剪切成较小团块(或糊状)
，应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松
，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡
，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液

，接种培养后
，细胞容易贴壁生长。

大鼠白三烯C4(LTC4)检测试剂盒

，英文名： LTC4 ELISA Kit

Mouse beta hexosaminidase A (beta -hexosaminidase A) ELISA Kit 小鼠β氨基己糖苷酶A(β-hexosaminidase A)检测试剂盒

ELISA 小鼠胰高血糖素样肽-1(mouse GLP-1)  进口分装

CLIAKitforIRAK(Humanierleukieceptorassociatedkinase)ELISAKit人白介素受体相关激酶

通用型非变性裂解液适合各种细胞native蛋白

ELISAKitACS大鼠脂酰合成酶

THSD1重组小鼠 THSD1 / TMTSP 蛋白 Protein

bovine Insulin protein 牛胰岛素蛋白 10mgbovine Insulin protein 牛胰岛素蛋白

BMPR1B重组人 BMPR1B / ALK-6 (149-502) 蛋白 (His & GST 标签) Protein

GOLM1 Protein Human 重组人 GOLM1 / GP73 蛋白

MBL1 Protein Rat 重组大鼠 MBL1 蛋白 (Fc 标签)

CCP peptide (cyclic citrullinated peptide,CCP 0.5mgCCP peptide (cyclic citrullinated peptide,CCP) 瓜环肽

GOLM1 Protein Human 重组人 GOLM1 / GP73 蛋白

MEP1A重组小鼠 MEP1A 蛋白 Protein

TGFB1 Protein Rat 重组大鼠 Latent TGF-beta 1 / TGFB1 蛋白

UBE2D4重组人 UBE2D4 蛋白 Protein

小鼠白介素1(IL-1)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human advanced glycation end product receptor (RAGE/AGER) ELISA Kit 人晚期糖基化终末产物受体(RAGE/AGER)检测试剂盒

HumanN-MIDOsteocalcin,N-MID-OTELISAKit 人N端中段骨钙素(N-MID-OT)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCaspase-9,Casp-9检测试剂盒人胱天蛋白酶9(Casp-9)检测试剂盒规格：96T/48T

转基因油菜(canola)HCN28品系试剂盒20次

humansimilaoRIKENcDNA3110050K21geneELISAKit人类似RIKENcDNA3110050K21基因检测试剂盒规格

：96T/48T

兔冠状动脉成纤维细胞兔子层连蛋白/板层素(LN)ELISAKIT   ELISA.   96T/48T

兔环0酸腺苷(cAMP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

T-25培养瓶充满培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。本公司的所有产品仅用于科学研究或者工业科研等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗

，非药用
，非食用