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细胞简介：

人NK分离自人外周血单个核细胞
；NK细胞即自然杀伤细胞（natural killer cell
，NK）是机体重要的免疫细胞
，不仅与抗肿瘤
、 抗病毒感染和免疫调节有关
，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生，能够识别靶细胞、杀伤介质。NK细胞来源于骨髓淋巴样干细胞，其分化、发育依赖于骨髓及微环境
，主要分布于骨髓
、外周血、肝、脾、肺和淋巴结。NK细胞不同于T

、B细胞，是一类无需预先致敏就能非特异性杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的淋巴细胞
。由于NK细胞的杀伤活性无MHC限制，不依赖抗体
，因此称为自然杀伤活性。NK细胞胞浆丰富，含有较大的嗜天青颗粒，颗粒的含量与NK细胞的杀伤活性呈正相关。NK细胞作用于靶细胞后杀伤作用出现早，在体外1小时、体内4小时即可见到杀伤效应。NK细胞的靶细胞主要有某些肿瘤细胞（包括部分细胞系）、病毒感染细胞、某些自身组织细胞（如血细胞）、寄生虫等，因此NK细胞是机体抗肿瘤
、抗感染的重要免疫因素
，也参与第Ⅱ型超敏反应和移植物抗宿主反应。

方法简介
：

公司实验室分离的人外周血NK采用取外周血

、通过密度梯度离心、差速贴壁、细胞因子诱导法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人源NK经CD56免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息
：

培养基 含IL-2
、IL-15、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 悬浮

细胞形态 短梭形

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相

：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一
、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小

；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3

、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

大鼠基转移酶(ALT)检测试剂盒

，英文名
： ALT ELISA Kit

Mouse alpha glathione S ansferase (-GST) ELISA Kit 小鼠αS转移酶(α-GST)检测试剂盒

ELISA 小鼠促卵泡素(mouse FSH)  进口分装

CLIAKitfom-1(MouseKidneyinjurymolecule1)ELISAKIT小鼠肾损伤分子1

通用型蛋白电泳考马斯亮蓝染色试剂盒10次

ELISAKitTGF-α大鼠转化生长因子α

PRDX5重组小鼠 Peroxiredoxin 5 / PRDX5 蛋白 Protein

V-Rel网状内皮增生病毒癌基因同源物A(RELA)重组蛋白 Recombinant V-Rel Reticuloendotheliosesis Viral Oncogene Homolog A (RELA)

RAMP3重组人 RAMP3 蛋白 (Fc 标签) Protein

HSPD1 Protein Human 重组人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 标签)

BTLA Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 BTLA 蛋白 (Fc 标签)

干扰素α4(IFNα4)重组蛋白 Recombinant Interferon Alpha 4 (IFNa4)

HSPD1 Protein Human 重组人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 标签)

SMAD5重组小鼠 Smad5 蛋白 (His & GST 标签) Protein

FCGR3 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD16 / FCGR3 蛋白 (His & AVI 标签), Biotinylated

GPD1重组人 GPD1 / Glycerolphosphate Dehydrogenase 1 蛋白 Protein

小鼠CD8分子(CD8)检测试剂盒 96T/48T

Rat pepsin (Pepsin) ELISA Kit 大鼠(Pepsin)检测试剂盒

Humancatecholamine,CAELISAKit 人儿茶酚胺(CA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCompleme1q,C1q检测试剂盒人补体1q(C1q)检测试剂盒规格
：96T/48T

组织a-(a-AMYLASE)活性CNPG3比色法定量检测试剂盒20次

Humanpunjecellaoaibody,PCA-1/YoELISAKit人抗浦肯野细胞抗体/抗Yo抗体(PCA-1/Yo)检测试剂盒规格：96T/48T

人源NK细胞兔骨桥素(OPN)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔钩端IgG(Lebtospira)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔儿茶酚胺(CA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔超敏C反应蛋白(hs-CRP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。