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实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化

；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

人外周血单个核分离自外周血；外周血是除骨髓之外的血液
，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞

，242net必赢把这样得到的干细胞称为外周血干细胞
，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中提出外周血这一新概念


。外周血单个核细胞(PBMC)即外周血中具有单个核的细胞

，包括淋巴细胞和单核细胞。目前
，主要的分离方法是密度梯度离心法，因为血液中各有形成分的比重存在差异，因此得以分离出不同的细胞。

方法简介：

公司实验室分离的人外周血单个核采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人外周血单个核经过检测
，且不含有HIV-1、HBV
、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS

、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 半贴半悬浮

细胞形态 圆形

传代特性 不增殖；不传代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品
：

小鼠免疫细胞表面抗原分子CD8+   英文名称：   Mouse Cluster of Differeiation 8+   规格
：      英文缩写：   CD8+

小鼠免疫细胞表面抗原分子8   英文名称：   Mouse Cluster Of Differeiation 8   规格：      英文缩写
：   CD8+

小鼠1型胶原   英文名称：   Mouse Collagen Type 1   规格：      英文缩写：   C1

小鼠3型胶原   英文名称
：   Mouse Collagen Type 3   规格：      英文缩写
：   C3

小鼠去甲(NE)试剂盒 96T/48T

Human urokinase type plasminogen activator receptor (PLAUR/uPAR) ELISA Kit 人型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)试剂盒

Humanmammaliaargetofrapamyein,mTORELISAKit 人雷帕霉素靶蛋白(mTOR)试剂盒 96T/48T 进口分装

GuineaPigmonocytechemotacticprotein4,MCP-4试剂盒豚鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)试剂盒规格
：96T/48T

真菌/酵母细胞可溶性总蛋白制备试剂盒20次

MouseBrainderivedneuroophicfacor,BDNFELISAKit小鼠脑源性神经营养因子(BDNF)试剂盒规格
：96T/48T

CD200重组食蟹猴 CD200 蛋白 (Fc 标签) Protein

MAG (Myelin associated glycoprotein; L-MAG;MAG-a 0.5mgMAG (Myelin associated glycoprotein; L-MAG;MAG-a ) 髓鞘相关糖蛋白(抗原)

FCGR3A重组人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Phe, His & AVI 标签) Protein

CRIP2 Protein Human 重组人 CRIP2 蛋白

CAMK4 Protein Mouse 重组小鼠 CAMK4 / CaMKIV 蛋白 (His & GST 标签)

MAG (Myelin associated glycoprotein; L-MAG;MAG-a 0.5mgMAG (Myelin associated glycoprotein; L-MAG;MAG-a ) 髓鞘相关糖蛋白(抗原)

CRIP2 Protein Human 重组人 CRIP2 蛋白

CD200重组食蟹猴 CD200 蛋白 (Fc 标签) Protein

CAMK4 Protein Mouse 重组小鼠 CAMK4 / CaMKIV 蛋白 (His & GST 标签)

FCGR3A重组人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Phe, His & AVI 标签) Protein

人外周血单个核细胞大鼠神经元衍生孤儿受体1(NOR1)试剂盒 ，英文名
： NOR1 ELISA Kit

Mouse surface membrane immunoglobulin (SmIg) ELISA Kit 小鼠细胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)试剂盒

Ratacetylcholine,ACHELISAKit 大鼠乙酰(Ach)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHBsAb(Humanai-hepatitisBvirussurfaceaibody)ELISAKit人抗乙型肝病毒表面抗体

细胞艾滋病毒1蛋白酶(HIV-1PROTEASE)活性荧光淬灭法定量试剂盒20次

SheepIerleukin1β,IL-1βELISAKit绵羊白介素1β(IL-1β)试剂盒规格：96T/48T