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实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6

、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介
：

人输尿管平滑肌分离自输尿管组织；输尿管上接肾盂

，下连膀胱，是一对细长的管道
，呈扁圆柱状
，位于腹膜后，为一肌肉粘膜所组成管状结构
，沿腰大肌内侧的前方垂直下降进入骨盆
。输尿管有三个狭窄部：一个在肾盂与输尿管移行处(输尿管起始处)；一个在越过小骨盆入口处；后一个在进入膀胱壁的内部。这些狭窄是结石
、及坏死组织容易停留的部位。输尿管——膀胱连接处有一种特殊结构，即瓦耳代尔鞘，它能有效地防止膀胱内尿液返流到输尿管
。临床上将输尿管分为上

、中
、下三段
，也可称为腹段、盆段
、膀胱段。其中
，腹段自肾盂输尿管交界处，到跨越髂动脉处；盆段
，自髂动脉到膀胱壁
；膀胱段
，自膀胱壁内斜行至膀胱粘膜、输尿管开口
。输尿管管壁分为4层，黏膜层
、固有层、肌层
、外膜。黏膜层表面为移行上皮，约有4-5层细胞
；固有层由细密的结缔组织构成，内含胶原纤维和少量弹性纤维；输尿管肌层主要由内纵和外环两层平滑肌组成
；外膜为疏松结缔组织，营养血管由外膜进入输尿管
。输尿管有较厚的平滑肌层
，可作节律性的蠕动，使尿液不断的流入膀胱
。因此对输尿管平滑肌运动的研究
，是尿动力学的重要研究方向。

方法简介
：

实验室分离的人输尿管平滑肌采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的人输尿管平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基

：基础培养基，含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态：长梭形

传代特性：可传3-5代左右，3代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件
：气相：空气，95%；CO2，5%

人输尿管平滑肌体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书

，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面

，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因

，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品
：

小鼠廋素   英文名称：   Leptin   规格
：      英文缩写
：   Leptin

小鼠廋素受体   英文名称：   Leptin receptor   规格：      英文缩写
：   Leptin R

小鼠促黄体生成激素   英文名称
：   leinizing hormone   规格：      英文缩写：   LH

小鼠   英文名称
：   Lysozyme   规格
：      英文缩写

：   Lysozyme

小鼠羧甲基赖酸(CML)试剂盒 96T/48T

Human ovalbumin specific IgE (OVA sIgE) ELISA Kit 人卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)试剂盒

HumanIerleukin1βconveingenzyme,ICEELISAKit 人白介素1β转换酶(ICE)试剂盒 96T/48T 进口分装

DeerInsulin-likegrowthfactorbindingprotein3,IGFBP-3试剂盒胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞线粒体复合物III蛋白表达荧光显微镜试剂盒10/20次

MouseEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISAKit小鼠内皮型合成酶3(eNOS-3)试剂盒规格：96T/48T

IL11RA重组小鼠 IL11RA / IL11Rα 蛋白 Protein

CD117/c-kit/SCFR 干细胞生长因子受体/细胞表面分化抗原(抗原 0.5mgCD117/c-kit/SCFR 干细胞生长因子受体/细胞表面分化抗原(抗原)

FTL重组人 FTL / ferritin, light polypeptide 蛋白 Protein

CIB2 Protein Human 重组人 CIB2 / KIP-2 蛋白

LAYN Protein Rat 重组大鼠 Layilin / LAYN 蛋白

CD117/c-kit/SCFR 干细胞生长因子受体/细胞表面分化抗原(抗原 0.5mgCD117/c-kit/SCFR 干细胞生长因子受体/细胞表面分化抗原(抗原)

CIB2 Protein Human 重组人 CIB2 / KIP-2 蛋白

IL11RA重组小鼠 IL11RA / IL11Rα 蛋白 Protein

LAYN Protein Rat 重组大鼠 Layilin / LAYN 蛋白

FTL重组人 FTL / ferritin, light polypeptide 蛋白 Protein

人输尿管平滑肌细胞大鼠生长停滞特异性蛋白6(GAS6)试剂盒 ，英文名
： GAS6 ELISA Kit

Mouse vitamin D3 (VD3) ELISA Kit 小鼠3(VD3)试剂盒

RatN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGELISAKit 大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHD(MouseHistoneDeacetylase)ELISAKit小鼠组织蛋白去乙酰化酶

细胞TUNEL显色法(DAB)测定试剂盒10/20次

ELISAKitLCA扁豆凝集素