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实验报告
：

一
、分离与培养：

1

、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

人食管癌成纤维分离自食管癌组织；食管癌是常见的消化道肿瘤
，每年约有30万人死于食管癌。其发病率和死亡率各国差异很大。我国是世界上食管癌高发地区之一，每年平均病死约15万人。男多于女，发病年龄多在40岁以上。食管癌典型的症状为进行性咽下困难，先是难咽干的食物，继而是半流质食物，后水和唾液也不能咽下
。成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分
，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大
，轮廓清楚
，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构
，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显
。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性

，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的成纤维细胞呈圆形、折光性良好
，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁

，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起
；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰
，分布较均匀
，散在生长
，不聚集成团；细胞生长迅速

，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密
，有的交叉重叠生长，平坦
、胞体较大
，细胞质透明，细胞核较大
，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介：

实验室分离的人食管癌成纤维采用 - 胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来

，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的人食管癌成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV、HCV
、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性
：可传5代左右；3代以内状态佳

消化液
：0.25%

培养条件：气相：空气
，95%；CO2，5%

人食管癌成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养

，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠蛋白激酶抑制因子γ(PKIγ)检测试剂盒 ，英文名
： PKIγ ELISA Kit

L phenylalanine ammonia lyase (PAL) ELISA Kit 人L苯解氨酶(PAL)检测试剂盒

RatIerleukin5,IL-5ELISAKIT 大鼠白介素5(IL-5)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforCyclin-D3ELISAKit大鼠细胞周期素D3

细胞色素P450亚酶CYP2C19(CEC)活性荧光定量检测试剂盒20次

RatFibronectin,FNELISAKit大鼠纤连蛋白(FN)检测试剂盒规格：96T/48T

DLL1重组大鼠 DLL1 / Delta-like Protein 1 蛋白 (Fc 标签) Protein

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AGO3重组人 AGO3 / Argonaute 3 / EIF2C3 蛋白 Protein

IL17RC Protein Human 重组人 IL17RC 蛋白 (aa 1-454, His 标签)

EPOR Protein Mouse 重组小鼠 EPOR 蛋白

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IL17RC Protein Human 重组人 IL17RC 蛋白 (aa 1-454, His 标签)

DLL1重组大鼠 DLL1 / Delta-like Protein 1 蛋白 (Fc 标签) Protein

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AGO3重组人 AGO3 / Argonaute 3 / EIF2C3 蛋白 Protein

豚鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human cytotoxin associated protein A (CagA) ELISA Kit 人细胞毒素相关蛋白A(CagA)检测试剂盒

Humanai-cardiolipinaibodyIgM,ACA-IgMELISAKit 人抗心0脂抗体IgM(ACA-IgM)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humancaneouslymphocyte-associatedaigen,CLA检测试剂盒人皮肤淋巴细胞相关抗原(CLA)检测试剂盒规格：96T/48T

组织EPHB3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

humanprogestinandadipoQreceptorfamilymemberⅦ,PAQR7ELISAKit人孕同和adipoQ受体家族成员Ⅶ(PAQR7)检测试剂盒规格
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人食管癌成纤维细胞三(羟甲基)基盐酸盐   100g

is,Hydrochloride   500g

曲拉通X-100   100ml

itonX-100   250ml