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实验报告：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

人膀胱成纤维分离自膀胱组织
；膀胱是一个储尿器官，在哺乳类动物，它是由平滑肌组成的一个囊形结构
，位于骨盆内
，其后端开口与尿道相通。膀胱与尿道的交界处有括约肌
，可以控制尿液的排出。膀胱壁由三层组织组成，由内向外为黏膜层、肌层和外膜
。肌层由平滑肌纤维构成，称为逼尿肌
，逼尿肌收缩，可使膀胱内压升高，压迫尿液由尿道排出
。在膀胱与尿道交界处有较厚的环形肌，形成尿道内括约肌
。在括约肌收缩能关闭尿道内口
，防止尿液自膀胱漏出。膀胱壁分为三层：即浆膜层（蜂窝脂肪组织）、肌肉层（逼尿肌
、膀胱三角区肌）和黏膜层（极薄的一层移行上皮组织）
。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来
。成纤维细胞较大，轮廓清楚
，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动
，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的膀胱成纤维细胞呈圆形、折光性良好
，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁
，其中部分开始伸出伪足

，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形
，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态

，细胞排列紧密
，有的交叉重叠生长
，平坦
、胞体较大
，细胞质透明
，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布
。膀胱成纤维细胞分泌的生长因子是一种具有多功能的促有丝分裂原，研究已表明其参与恶性肿瘤的形成过程。近年来

，碱性成纤维细胞生长因子在膀胱癌发病过程中的作用
、与生物学行为之间的关系以及治疗上的应用已受到重视
。

方法简介

：

公司实验室分离的人膀胱成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人膀胱成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息
：

培养基 含FBS

、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系
，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

小鼠骨特异性碱性0酸酶B(ALP-B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠转铁蛋白受体(TFR/CD71)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠半胱酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠抗心0脂抗体IgA(ACA-IgA)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat ai endomysial aibody IgA (EMA IgA) ELISA Kit 大鼠抗肌内膜抗体IgA(EMA IgA)试剂盒

HumanHemoglobinH,HbHELISAKit 人血红蛋白H(HbH)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanamyloidbetapeptide1-42,Aβ1-42试剂盒96T人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)试剂盒规格：96T/48T

植物多胺氧化酶(PAO)活性比色法定量试剂盒20次

MonkeyCollageypeⅣ,ColⅣELISAKit猴Ⅳ型胶原(ColⅣ)试剂盒规格：96T/48T

CAMK4重组小鼠 CAMK4 / CaMKIV 蛋白 Protein

S转移酶μ2(GSTμ2)重组蛋白 Recombinant Glutathione S Transferase Mu 2, Muscle (GSTm2)

PLAC9重组人 PLAC9 / Placenta-specific 9 蛋白 (Fc 标签) Protein

DPP10 Protein Human 重组人 DPP10 / DPRP3 蛋白

CD274 Protein Canine 重组狗 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白 (Fc 标签)

S转移酶μ2(GSTμ2)重组蛋白 Recombinant Glutathione S Transferase Mu 2, Muscle (GSTm2)

DPP10 Protein Human 重组人 DPP10 / DPRP3 蛋白

CAMK4重组小鼠 CAMK4 / CaMKIV 蛋白 Protein

CD274 Protein Canine 重组狗 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白 (Fc 标签)

PLAC9重组人 PLAC9 / Placenta-specific 9 蛋白 (Fc 标签) Protein

人膀胱成纤维细胞大鼠细胞色素P450家族成员1A2(CYP1A2)试剂盒
，英文名： CYP1A2 ELISA Kit

Mouse nerve nuition factor 4 (-4) ELISA Kit 小鼠神经营养因子4(-4)试剂盒

Mousebrain-gpeptides,BGP/GehrelinElisakit 小鼠脑肠肽(BGP/Gehrelin)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHSP-70(MouseHeatShockProtein70)ELISAKit小鼠热休克蛋白70

细胞KSHV(KAPOSISARCOMA-ASSOCIATEDHERPESVIRUS)病毒定量PCR扩增试剂盒20次

ELISAKitIL-23大鼠白介素23