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实验报告

：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2

、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介
：

人淋巴血管内皮分离自淋巴管组织

；淋巴管由毛细淋巴管汇合而成。其形态结构与静脉相似，但管径较细
，管壁较薄，瓣膜较多且发达，外形呈串珠状。淋巴管根据其位置分为浅、深二种
。它们管位于皮下，常与浅静脉伴行，收集皮肤和皮下组织的淋巴
。深淋巴管与深部血管伴行，收集肌肉和内脏的淋巴
。浅、深淋巴管之间有广泛的交通支
。淋巴管在向心行程中
，通常经过一个或多个淋巴结
，从而把淋巴细胞带入淋巴液。主要功能是滤过淋巴液，产生淋巴细胞和浆细胞
，参与机体的免疫反应。当局部感染时，细菌、病毒或癌细胞等可沿淋巴管侵入，引起局部淋巴结肿大。如该淋巴结不能阻止和消灭它们
，则病变可沿淋巴管的流注方向扩散和转移。淋巴管内皮细胞（LEC）是衬覆于淋巴管内表面的一种单层扁平上皮，是构成淋巴管壁的主要结构，参与维持体液平衡，调节淋巴细胞再循环和机体的免疫反应和组织液及蛋白质的运输
，在疾病过程中也起着重要作用。近年研究表明
，LEC还在伤口愈合、淋巴管水肿和炎症扩散等病理过程中起重要作用
，而且与肿瘤转移密切相关。淋巴管内皮细胞主要功能：①调节体液
、蛋白和组织压力平衡；②为免疫系统的重要组成部分
。淋巴管内皮细胞与主要病生理变化：①囊肿型淋巴管瘤；②淋巴管炎
；③淋巴结核。

方法简介
：

公司实验室分离的人淋巴血管内皮采用-胶原酶联合消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人淋巴血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上

，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相

：空气，95%；CO2，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系

，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

大鼠肉毒碱棕榈酰基转移酶2(CPT2)检测试剂盒 ，英文名： CPT2 ELISA Kit

Mouse angiotensinogen (aGT) ELISA Kit 小鼠血管紧张素原(aGT)检测试剂盒

RatThyroglobulin,TGELISAKit 大鼠甲状腺球蛋白(TG)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGzms-A(MousegranzymesA)ELISAKit小鼠颗粒酶A

细胞长链羟脂酰脱氢酶(HYDROXYACYLCOADEHYDROGENASE)活性比色法定量检测试剂盒20次

Raturokinaseplasminogenactivator,uPAELISAKit大鼠型纤溶酶原激活物(uPA)检测试剂盒规格：96T/48T

NMNAT1重组人 NMNAT1 / NMNAT 蛋白 Protein

SPAG5/map126 相关抗原5(多肽抗原 0.5mgSPAG5/map126 相关抗原5(多肽抗原)

GPC3重组人 Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 蛋白 Protein

HIST2H4A Protein Human 重组人 Histone H4 / HIST2H4A 蛋白

PTPN1 Protein Human 重组人 PTP1B / PTPN1 蛋白

SPAG5/map126 相关抗原5(多肽抗原 0.5mgSPAG5/map126 相关抗原5(多肽抗原)

HIST2H4A Protein Human 重组人 Histone H4 / HIST2H4A 蛋白

NMNAT1重组人 NMNAT1 / NMNAT 蛋白 Protein

PTPN1 Protein Human 重组人 PTP1B / PTPN1 蛋白

GPC3重组人 Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 蛋白 Protein

小鼠N-乙酰-β-D-基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat ferritin (FE) ELISA Kit 大鼠铁蛋白(FE)检测试剂盒

HumanDehydroepiandrosteronesulfate,DHEA-SELISAKit 人脱轻表雄酮硫酸酯(DHEA-S)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCobravenomneuronalprotectivefactor,CVNPF检测试剂盒人神经保护因子(CVNPF)检测试剂盒规格：96T/48T

组织3-0酸甘油脱氢酶(GAPDH)活性酶动力比色法定量检测试剂盒20次

HumaegulatedonactivationinnormalT-cellexpressedandsecreted,RAESELISAKit人正常T细胞表达和分泌因子(RAES/CCL5)检测试剂盒规格
：96T/48T

人淋巴血管内皮细胞兔内皮型合成酶检测试剂盒   兔内皮型合成酶试剂盒   规格型号：96T/48T   兔内皮型合成酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名：兔内皮型合成酶试剂盒、兔内皮型合成酶检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

兔基质金属蛋白酶1检测试剂盒   兔基质金属蛋白酶1试剂盒   规格型号
：96T/48T   兔基质金属蛋白酶1试剂盒，规格型号：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：兔基质金属蛋白酶1试剂盒、兔基质金属蛋白酶1检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
。

兔子白介素2检测试剂盒   兔子白介素2试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子白介素2试剂盒，规格型号：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名
：兔子白介素2试剂盒
、兔子白介素2检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期
：6个月。

人α2巨球蛋白检测试剂盒   人α2巨球蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   人α2巨球蛋白试剂盒，规格型号
：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装）

，产品别名
：人α2巨球蛋白试剂盒、人α2巨球蛋白检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。