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细胞简介：

人口腔角质形成分离自口腔组织；口腔黏膜在组织学形态上分为上皮、固有层和黏膜下层
；口腔黏膜上皮细胞按是否参与角化被分为角质形成细胞与非角质形成细胞，主要由角质形成细胞构成；前者组成复层鳞状上皮，后者游离分布于上皮层内。根据在口腔内部位的不同，复层鳞状上皮可分为角化、不全角化或无角化型等几类。以角化型上皮为例，由上皮的深面至浅面可分为基层、棘层、粒层及角化层等四层。

方法简介：

实验室分离的人口腔角质形成采用先机械分离法
、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的人口腔角质形成经PCK免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV

、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基：基础培养基，含FBS
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性

：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

传代特性
：2-3代

消化液：0.25%

培养条件：气相
：空气
，95%
；CO2，5%

人口腔角质形成体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告
：

一

、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养

；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min

，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次

，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠补体C5a(C5a)检测试剂盒 
，英文名
： C5a ELISA Kit

Mouse alpha 2 aiplasmin (alpha 2-AP) ELISA Kit 小鼠α2抗纤溶酶(α2-AP)检测试剂盒

ELISA 小鼠促红细胞生成素(mouse EPO)  进口分装

CLIAKitforKLK8(Humanurokinase-typeplasminogenactivator)ELISAKit人8

通用型鲍氏志贺菌Shigellaboydii试剂盒20次

ELISAKitHD大鼠组织蛋白去乙酰化酶

IL12RB2重组小鼠 IL12RB2 / IL12R-beta 2 蛋白 Protein

Apo J/Clusterin- Alpha/ Beta(Apolipoprotein J 0.5mgApo J/Clusterin- Alpha/ Beta(Apolipoprotein J) 凝聚素α/β抗原

SHH重组人 SHH / Sonic hedgehog 蛋白 (aa 198-462, His 标签) Protein

HTRA2 Protein Human 重组人 HTRA2 / OMI 蛋白

REG4 Protein Rat 重组大鼠 REG4 蛋白 (Fc 标签)

Apo J/Clusterin- Alpha/ Beta(Apolipoprotein J 0.5mgApo J/Clusterin- Alpha/ Beta(Apolipoprotein J) 凝聚素α/β抗原

HTRA2 Protein Human 重组人 HTRA2 / OMI 蛋白

IL12RB2重组小鼠 IL12RB2 / IL12R-beta 2 蛋白 Protein

REG4 Protein Rat 重组大鼠 REG4 蛋白 (Fc 标签)

SHH重组人 SHH / Sonic hedgehog 蛋白 (aa 198-462, His 标签) Protein

小鼠BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat iercellular adhesion molecule 2 (ICAM-2/CD102) ELISA Kit 大鼠细胞间粘附分子2(ICAM-2/CD102)检测试剂盒

Humanangiotensinogen,aGTELISAKit 人血管紧张素原(aGT)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCompleme7,C7检测试剂盒人补体7(C7)检测试剂盒规格：96T/48T

组织BMK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanPulmonarysurfatca-associatedproteinA
，SP-AELISAKit人肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)检测试剂盒规格
：96T/48T

人口腔角质形成细胞兔儿茶酚胺(CA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔交联物(PY)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔交联物(PY)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔糖化血红蛋白A1c(A1c)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象

。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。