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实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介
：

人结肠成纤维分离自结肠组织；结肠在右髂窝内续于盲肠，在第3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部分

，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母“M"，将小肠包围在内。结肠横切面由内到外依次为：黏膜（上皮层
、固有层、黏膜肌层）
，黏膜下层（疏松结缔组织），肌层（内环形、外纵行两层平滑肌）
，外膜（纤维膜或浆膜）。结肠成纤维细胞主要分布于外膜（纤维膜或浆膜）结缔组织内。成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的结肠成纤维细胞呈圆形
、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁
，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起
；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰
，分布较均匀，散在生长

，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦

、胞体较大，细胞质透明
，细胞核较大
，呈椭圆形，颜色淡
。细胞融合
，并彼此连接成网状
；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介
：

实验室分离的人结肠成纤维采用 - 胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的人结肠成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基：含FBS、bFGF、Insulin
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性：可传3-5代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相
：空气，95%；CO2，5%

人结肠成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养

，以此保证该细胞的佳培养状态
。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系
，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

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DDR2 Protein Mouse 重组小鼠 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白

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人结肠成纤维细胞小鼠糖皮质类固醇受体检测试剂盒   小鼠糖皮质类固醇受体试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠糖皮质类固醇受体试剂盒，规格型号：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装）
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豚鼠基质金属蛋白酶抑制因子1检测试剂盒   豚鼠基质金属蛋白酶抑制因子1试剂盒   规格型号：96T/48T   豚鼠基质金属蛋白酶抑制因子1试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：豚鼠基质金属蛋白酶抑制因子1试剂盒
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。

豚鼠主要组织相容性复合体检测试剂盒   豚鼠主要组织相容性复合体试剂盒   规格型号：96T/48T   豚鼠主要组织相容性复合体试剂盒
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：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：豚鼠主要组织相容性复合体试剂盒、豚鼠主要组织相容性复合体eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
。