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细胞简介
：

人骨骼肌分离自四肢肌肉组织
；骨骼肌又称横纹肌，肌肉中的一种
，约占全身重量的40%。骨骼肌纤维为长柱形的多核细胞
，肌膜的外面有基膜紧密贴附
。属于横纹肌
，横纹肌还包括心肌与内脏横纹肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每块肌肉都是具有一定形态、结构和功能的器官，有丰富的血管、淋巴分布，在躯体神经支配下收缩或舒张

，进行随意运动。肌肉可根据共形状、大小
、位置
、起止点、纤维方向和作用等命名。依形态命名的如斜方肌
、菱形肌
、三角肌
、梨状肌等。骨骼肌细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹
，核很多，且都位于细胞膜下方
。肌细胞内有许多沿细胞长轴平行排列的细丝状肌原纤维
。每一肌原纤维都有相间排列的明带（Ⅰ带）及暗带（A带）
。明带染色较浅，而暗带染色较深。暗带中间有一条较明亮的线称H线。H线的中部有一M线。明带中间，有一条较暗的线称为Z线。两个Z线之间的区段，叫做一个肌节。骨骼肌细胞也称横纹肌细胞
，细胞呈纤维状，不分支
，有明显横纹，核很多
，且都位于细胞膜下方，细胞多呈梭行，具有一定的方向性。骨骼肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中
；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起
，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快
，4-6天即可汇合
，并保持上述形态学特征和生长特点。

方法简介
：

公司实验室分离的人骨骼肌采用胶原酶消化法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人骨骼肌经α-Sarcometric actin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV
、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气
，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养

：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗


，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠6前列腺素(6-K-PG)试剂盒     试剂盒   组装/原装

小鼠5羟色胺(5-HT)试剂盒     试剂盒   组装/原装

小鼠5核苷酸酶(5-)试剂盒     试剂盒   组装/原装

小鼠Ⅳ型胶原(ColⅣ)试剂盒     试剂盒   组装/原装

小鼠肝病毒抗体(HV-Ab)试剂盒

Human decay accelerating factor (DAF/CD55) ELISA Kit 人衰变加速因子(DAF/CD55)试剂盒

Humaissue-typePlasiminogenActilyse,t-PAELISAKit 人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)试剂盒 进口分装

HumanAi-titinAibody,TTN试剂盒人抗肌联蛋白抗体(TTN)试剂盒

植物氧化型(GSSG)浓度荧光定量试剂盒50次

Humanansforminggrowthfactorα，TGF-αELISAKit人转化生长因子α(TGF-α)试剂盒

FCGR4重组小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His & AVI 标签), Biotinylated Protein

ADAMTS7 peptide 整合素样金属蛋白酶与1型-7抗原 0.5mgADAMTS7 peptide 整合素样金属蛋白酶与1型-7抗原

WWP2重组人 WWP2 蛋白 (His & GST 标签) Protein

FCGR2A Protein Human 重组人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His 标签)

EPCAM Protein Rat 重组大鼠 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白 (His 标签)

促肾上皮质激素释放激素(CRH)重组蛋白 Recombinant Corticotropin Releasing Hormone (CRH)

FCGR2A Protein Human 重组人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His 标签)

MAPK1重组小鼠 ERK2 / MAPK1 / MAPK2 蛋白 (His & GST 标签) Protein

TNFRSF14 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 HVEM / TNFRSF14 蛋白

GUCA1A重组人 GCAP1 / GUCA1A 蛋白 Protein

人骨骼肌细胞大鼠血管细胞粘附分子1(VCAM1)试剂盒 ，英文名
： VCAM1 ELISA Kit

Mouse Glucose depende insulinoopic polypeptide (GIP) ELISA Kit 小鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)试剂盒

Mousetissueinhibitorsofmetalloproteinase2,TIMP-2ELISAkit 小鼠基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)试剂盒 进口分装

CLIAKitforHumanCampylobacterJejuniPEB1ELISAKit人空肠弯曲菌黏附蛋白

细胞CSF1R激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitDA大鼠多巴胺

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系


。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系
，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。