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实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min


；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6

、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

人肠微血管内皮分离自肠道组织；肠道指的是从胃幽门至门的消化管。肠是消化管中长的一段
，也是功能重要的一段。哺乳动物的肠包括小肠、大肠和直肠3大段
。大量的消化作用和几乎全部消化产物的吸收都是在小肠内进行的，大肠主要浓缩食物残渣
，形成粪便，再通过直肠经门排出体外。肠道堪称身体劳累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足够的养分，其实它的功能还远不止此——它还是机体内大的微生态系统。微血管是极细微的血管，管径平均为6-9μm，连于动、静脉之间，互相连接成网状。微血管壁薄，管径较小
，血流很慢
，通透性大。其功能是利于血液与组织之间进行物质交换
。其管壁主要由一层内皮细胞构成，在内皮外面有一薄层结缔组织。另外还常可见到一种扁而有突起的细胞贴在微血管的管壁外面
，称为周细胞。

方法简介：

公司实验室分离的人肠微血管内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人肠微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息

：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）
，明胶（0.1%）

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%
；CO2
，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

兔子内皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA 试剂盒

People leils binding type AFP / AFP varia 2 (AFP-L2) ELISA kit E 人小扁结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)检测试剂盒E

Humanpolyimmunoglobulieceptor,poly-IgRELISAKit 人多免疫球蛋白受体(poly-IgR)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humandynorphin,Dyn检测试剂盒人强啡肽(Dyn)检测试剂盒规格
：96T/48T

组织P38a激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

Humanperoxisomeproliferatorsactivatorreceptorsalpha,PPAR-αELISAKit人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)检测试剂盒规格
：96T/48T

PTPN11重组小鼠 SHP2 / PTPN11 蛋白 Protein

泛素(Ub)重组蛋白 Recombinant Ubiquitin (Ub)

PRKAR1A重组人 PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 蛋白 Protein

CDK16 Protein Human 重组人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 蛋白 (GST 标签)

EFNA5 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白

转铁蛋白受体(TFR)天然蛋白 Native Transferrin Receptor (TFR)

CDK16 Protein Human 重组人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 蛋白 (GST 标签)

CD6重组小鼠 CD6 / TP120 蛋白 Protein

PRLR Protein Rat 重组大鼠 PRLR / Prolactin receptor 蛋白

CCL1重组人 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白 Protein

小鼠胃泌酸调节素(OXM)检测试剂盒 96T/48T

Human phosphoenolpyruvate carboxykinase (PCK) ELISA Kit 人0酸烯醇式酸羧激酶(PCK)检测试剂盒

Humanalkalinephosphatase,ALPELISAKit 人碱性0酸酶(ALP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenIerleukin1,IL-1检测试剂盒鸡白介素1(IL-1)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞ERK蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MouseGlycogenphosphorylaseMM,GP-MMELISAKit小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)检测试剂盒规格：96T/48T

人肠微血管内皮细胞小鼠纤维连接蛋白   英文名称：   Fibronectin   规格：      英文缩写
：   FN

FMS样酪酸激酶   英文名称：   Fms-related tyrosine kinase-3   规格
：      英文缩写：   Flt3

小鼠Flt3配体   英文名称
：   Fms-related tyrosine kinase-3 Ligand   规格
：      英文缩写：   Flt3 Ligand

小鼠纤维连接蛋白   英文名称：    fibronecti   规格：      英文缩写
：   FN