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实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min


，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介
：

人表皮角化分离自皮肤组织；表皮位于动物皮肤的外层，由胚胎时期外胚层形成，具有抗摩擦和抗损伤的作用。表皮是皮肤的浅层结构，由复层扁平上皮构成。从基底层到表面可分为五层，即基底层、棘层、颗粒层
、透明层和角质层。表皮角化细胞（KC）是构成表皮的主要细胞成分，在体内处于不断增殖过程中，分裂的角化细胞主要位于其基底层，少数位于棘细胞层
。随着向表层的推移，细胞的分化程度逐渐增加，并丧失分裂活性
。

方法简介：

公司实验室分离的人表皮角化先消化、后-胶原酶混合消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人表皮角化经PCNA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等

。

培养信息

：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例

、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞


，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

猪胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)ELISA 试剂盒

People of cyclooxygenase 2 (COX-2) ELISA Kit 人环加氧酶2(COX-2)检测试剂盒

Rabbiturokinaseplasminogenactivator,uPAELISAkit 兔型纤溶酶原激活物(uPA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforAP13(Humanapelin13)ELISAKit人apelin13

血清样品树脂法去内毒素试剂盒20次

PorcineIerleukin18,IL-18ELISAKit猪白介素18(IL-18)检测试剂盒规格：96T/48T

CD3D重组小鼠 CD3d / CD3 delta 蛋白 (Fc 标签) Protein

多功能肽酶2(LMP2)重组蛋白 Recombinant Large Multifunctional Peptidase 2 (LMP2)

MZB1重组人 MZB1 / PERP1 蛋白 Protein

CDH17 Protein Human 重组人 Cadherin-17 / LI-cadherin / CDH17 蛋白

TGFBR2 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 TGFBR2 蛋白 (Fc 标签)

多功能肽酶2(LMP2)重组蛋白 Recombinant Large Multifunctional Peptidase 2 (LMP2)

CDH17 Protein Human 重组人 Cadherin-17 / LI-cadherin / CDH17 蛋白

CD3D重组小鼠 CD3d / CD3 delta 蛋白 (Fc 标签) Protein

TGFBR2 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 TGFBR2 蛋白 (Fc 标签)

MZB1重组人 MZB1 / PERP1 蛋白 Protein

小鼠细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human phospho protein kinase C (P-PKC) ELISA Kit 人0酸化蛋白激酶C(P-PKC)检测试剂盒

HumanLipoxinA4,LXA4ELISAKit 人脂氧素A4(LXA4)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenInsulin-likegrowthfactors1,IGF-1检测试剂盒鸡胰岛素样生长因子1(IGF-1)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞DAPKINASE蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MousegranzymesA,Gzms-AELISAKit小鼠颗粒酶A(Gzms-A)检测试剂盒规格：96T/48T

人表皮角化细胞小鼠心素(mouse ANP)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠凋亡诱导因子(mouse AIF)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠抗利尿激素/血管加压素(mouse AVP/ADH)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠固(mouse ALD)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装