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实验报告
：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置


；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介：

大鼠阴道壁成纤维分离自阴道组织；阴道位于膀胱、尿道和直肠之间，是一个富有弹性的管状器官。它在人类生殖过程中具有多种生理功能
，是连接子宫与外阴的通道，是排出月经血

、娩出婴儿的必经之路
，也是一个重要的性交器官。阴道壁按组织学由外到内分三层
，即黏膜层、肌层和外膜
。1）黏膜层由上皮和固有膜组成。上皮较厚
，为复层鳞状上皮
，从基底层到表层由基底层、旁基底层、中间层和表层组成。没有角化层。阴道粘膜的基底层呈细波纹状起伏。2）肌层由平滑肌组织构成，肌束排列不规则
，纵行和环形互相交错。肌束间有较多的结缔组织和弹性纤维。阴道外口有环形的横纹肌称括约肌。3）外膜层为纤维膜，由结缔组织构成
，内含丰富的弹性纤维、静脉丛、淋巴管和神经。大鼠阴道壁成纤维细胞主要分离自外膜层，成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构
，其细胞核呈规则的卵圆形

，核仁大而明显

。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性
，具明显的蛋白质合成和分泌活动
，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性
、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠阴道壁成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠阴道壁成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1

、HBV
、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息
：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3-5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2
，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担


。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化


，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞

，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系
，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)检测试剂盒 ，英文名
： LDL-IC ELISA Kit

Pig hea muscle oponin I (cTn- I) ELISA Kit 猪心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)检测试剂盒

钩端核酸检测试剂盒(荧光PCR法) 48T

CLIAKitforLR/Ob-R(HumanLeptieceptor)ELISAKIT人苗条素受体

通用封阻缓冲液100毫升

ELISAKitAT-Ⅲ鸡抗Ⅲ抗体

MPL重组大鼠 c-MPL / CD110 / TPOR 蛋白 Protein

E.coli DH-5 Alpha(E.coli DH-5 Alpha Protein 0.5mgE.coli DH-5 Alpha(E.coli DH-5 Alpha Protein) DH 5 alpha 大肠杆菌菌体蛋白

LTF重组人 Lactotransferrin / LTF 蛋白 Protein

CD8B Protein Human 重组人 CD8B / P37 / LEU2 蛋白 (Fc 标签)

IFNAR1 Protein Mouse 重组小鼠 IFNAR1 / IFNAR 蛋白

E.coli DH-5 Alpha(E.coli DH-5 Alpha Protein 0.5mgE.coli DH-5 Alpha(E.coli DH-5 Alpha Protein) DH 5 alpha 大肠杆菌菌体蛋白

CD8B Protein Human 重组人 CD8B / P37 / LEU2 蛋白 (Fc 标签)

MPL重组大鼠 c-MPL / CD110 / TPOR 蛋白 Protein

IFNAR1 Protein Mouse 重组小鼠 IFNAR1 / IFNAR 蛋白

LTF重组人 Lactotransferrin / LTF 蛋白 Protein

小鼠纤维蛋白肽B(FPB)检测试剂盒 96T/48T

Human leucine aminopepridase (LAP) ELISA Kit 人亮氨酰氨基肽酶(LAP)检测试剂盒

Humanlipoteichoicacids,LTAELISAKit 人脂0壁酸(LTA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenfactorB,BF检测试剂盒鸡B因子(BF)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞CASPASE-4蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MousehepatitisBviruseaibody,HBeAbELISAKit小鼠乙型肝e抗体(HBeAb)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠阴道壁成纤维细胞小鼠血管内皮细胞生长因子B(mouse VEGF-B)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠血管内皮细胞生长因子C(mouse VEGF-C)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠血管内皮细胞生长因子D(mouse VEGF-D)   作用
：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠血管内皮细胞生长因子受体1(mouse VEGF-R1)   作用：   ELISA   规格：      进口分装