产品名称 ：重组人Fas配体,His-SUMO标签无动物源FasL
产品特点：重组人Fas配体,His-SUMO标签无动物源FasL的相关产品 ：HSP-90 Alpha(Heat Shock Protein 90 Alpha 0.5mgHSP-90 Alpha(Heat Shock Protein 90 Alpha ) 热休克蛋白90α抗体CD3E Protein Human 重组人 CD3e / CD3 epsilon 蛋白 (His & Fc 标签)
产品型号 ：
更新日期：2024-11-20
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重组人Fas配体,His-SUMO标签无动物源FasL的详细资料：
本产品具有下列特点:
1.操作简便 、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。
2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。
3. 与MTT相比,使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物 。
4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。
商品属性 ：
产品英文名称：Human FasL Protein, His-SUMO tag (Animal-Free)
产品中文名称：重组人Fas配体,His-SUMO标签无动物源FasL
规格 ：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg
货号 ：EY-01X8893
用途：仅供科研研究实验
特点&优势:
表达宿主:大肠杆菌
种属:人
序列:氨基酸序列来源于：人源FasL Protein (Gln130-Leu281) (P48023-1)
活性:Measure by its ability to induce apoptosis in Jurkat cells. The ED₅₀ for this effect is <1 ng/mL. The specific activity of recombinant human FasL is > 1 x 10⁶ IU/mg.
蛋白长度：重组人FasL 蛋白由1
背景
Fas Ligand (FasL) is a 17.34 kDa tumor necrosis factor with 152 amino acid residues. FasL is expressed from lymphoid tissue and secreted to blood. Binding to its receptor, TNFRSF6/FAS, leads to induce apoptotic signal into cells. Involved in cytotoxic T-cell-mediated apoptosis, natural killer cell-mediated apoptosis and in T-cell development.
操作步骤：
(一)获得目的基因
1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段 。
2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。
(二)构建重组表达载体
1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段 。
2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。
(三) 获得含重组表达质粒的表达菌种
1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定 。
2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点 。
3 、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。
(四)诱导表达
1 、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养 。
2 、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr) 。
3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。
4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min 。
5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。
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适用于人类或临床诊断
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