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        SuperKine•  增强型抗荧光淬灭剂

        产品名称:SuperKine• 增强型抗荧光淬灭剂

        产品特点:SuperKine• 增强型抗荧光淬灭剂的相关产品:DYKDDDDK Tag(CT 0.5mgDYKDDDDK Tag(CT)/Flag-Tag 标签DYKDDDDK Tag分支肽
        BMPR1B Protein Human 重组人 BMPR1B / ALK-6 (149-502) 蛋白 (His & GST 标签)
        MBL1重组大鼠 MBL1 蛋白 Protein

        产品型号:

        更新日期:2024-11-19

        访问次数 :344

        SuperKine• 增强型抗荧光淬灭剂的详细资料:

        产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断
        商品属性:

        产品英文名称 :SuperKine  Enhanced Antifade Mounting Medium

        产品中文名称:SuperKine  增强型抗荧光淬灭剂

        规格:10 mL/50 mL

        货号:EY-01X8578
        用途:仅供科研研究实验

        特点&优势:

          抗荧光淬灭效果强:封片后避光保存2周以上,仍可维持原有发光强度;

          兼容性好:精心优化的配方可兼容多种荧光染料

          操作便捷:即用型,无需配置。

        保存建议:-20℃,避光保存12个月 。

        运输条件:蓝冰运输

        背景

        由于光照、pH值及温度等环境影响 ,或荧光分子和其它分子相互作用等因素,造成的荧光分子的不可逆破坏即为荧光淬灭。荧光淬灭导致用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察时 ,可见的信号减弱 。抗荧光淬灭剂用于对荧光组织和细胞样品的封片,防止荧光淬灭。

        SuperKine•  增强型抗荧光淬灭剂

        本产品具有下列特点:

         1.操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。

        2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物 。

        3. 与MTT相比,使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。

        4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成 。

        操作步骤:

        (一)获得目的基因

        1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

        2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物  。

        (二)构建重组表达载体

        1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段 。

        2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

        (三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

        1 、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

        2 、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作 。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

        3 、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

        (四)诱导表达

        1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

        2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr) 。

        3 、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

        4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

        5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析 。

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