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使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意
：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高
，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）
。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6

，5
，4
，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍
，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）
。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)
，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照
。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照
。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中
，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照
。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复
。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。

参数规格：

储存条件
：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集
、处理及保存方法
1. 血清
：使用不含热原和内毒素的试管
，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清
。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测
，请按一次用量分装
，冻存于-20℃，避免反复冻融
，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
​
检测步骤
：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)
，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中
，充分混匀
，10000rpm离心10s
，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒
。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号
。报告基团：设置为FAM
。淬灭基团：NONE
，请勿选择ROX参比荧光。

颜料橙13Pigment orange 13
：623.49 C32H24Cl2N8O2：3520-72-7

4-(2-代乙酰)-2,2,6,6-四甲-1-氧自由：339.24- (2- iodobenzofuran carbamoylmethyl) -2,2,6,6- four -1- methyl piperidine oxygen radicals
：25713-24-0 C11H20IN2O2

何首乌苷Polygonum multiflorum glycosides：406.39C20H22O9：55327-45-2

5--6-硝喹啉：189.175- amino -6- nitro group：35975-00-9 C9H7N3O2

4-二甲-1-新戊氯吡鎓：228.764- two -1- dimethylamino neopentyl pyridinium chloride：109911-77-5 C12H21ClN2

氟锆酸钾
：283.3904Potassium fluoride：16923-95-8 K2ZrF6

5-溴-2-氯-4-(甲氧)-嘧：299.555- -2- -4- (phenyl group) - - - - - - -：205672-19-1 C11H8BrClN2O

4-(2,4-二氯苄氧)-1,3-二甲-5-吡唑甲磺酸盐：439.314- (2,4- two) -1,3- two methyl -5-
：58011-68-0 C19H16Cl2N2O4S

长春地辛Changchun notes
：753.93C43H55N5O7
：53643-48-4

肥胖带绦虫LAMP试剂盒食蟹猴 IL6ST / gp130 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

大鼠 CD153 / CD30L / TNFSF8 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

大鼠 PVRL2 基因全长ORF克隆

人 PD1 / PDCD1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签

人 CSNK1G3 转录变体3 基因全长ORF克隆

小鼠 PDCD2L 基因全长ORF克隆

人 EVI2A 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 SHC4 基因全长ORF克隆

大鼠 Cripto / TDGF1 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 TUBB 基因全长ORF克隆

人 IGFII / IGF2 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签

人 IL36G / IL1F9 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带His标签