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使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA
，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度
。
二
、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行

，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原
，本产品不提供活体病毒做阳性对照
，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号
。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL
，建议每次稀释 10 倍
，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）
。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中
，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照
。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复
。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值
，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。

参数规格：

储存条件
：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集
、处理及保存方法
1. 血清
：使用不含热原和内毒素的试管
，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物
。
4. 组织匀浆

：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存
：如果样本收集后不及时检测


，请按一次用量分装，冻存于-20℃

，避免反复冻融
，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
​
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s

。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)

，每个测试反应体系配制如下表
：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量
，加入一适当体积洁净离心管中
，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL
，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团
：设置为FAM
。淬灭基团
：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

5-氯-2-氟腈：155.565- chloro -2- Fluorobenzonitrile：57381-34-7 C7H3ClFN

氯铬酸钾：174.55Potassium chloride：16037-50-6 ClCrKO3

三硼氢钾溶液
：282.23Three phenyl boron potassium hydride solution：99747-36-1 C18H16BK

双(五甲环戊二)钴：329.39Double (five methyl cyclopentadienyl) cobalt：74507-62-3 C20H30Co 10*

氧代[5,10,15,20-四(4-吡)卟吩]合钛(IV)：680.55The four generation of oxygen [5,10,15,20- (4- pyridyl) porphine] titanium (IV)
：105250-49-5 C40H24N8OTi

钛酸锶：183.49Strontium titanate
：12060-59-2 O3SrTi

6--2-硫脲嘧
：204.256- phenyl -2-：36822-11-4 C10H8N2OS

粉防已碱Powder anti alkali：
：

阳离子蓝X-GRRLCationic blue X-GRRL：482.57364 C20H26N4O6S2

：12270-13-2

牛支原体LAMP试剂盒小鼠 NAALADL1 基因全长ORF克隆

小鼠 Angiopoietin-like3 基因全长ORF克隆

甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/2/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

小鼠 VDR / NR1I1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 CD200 ELISA配对抗体

食蟹猴 CD20 / MS4A1 (aa 213-297) 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 RLN1 / Relaxin-1 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

重组人 SHH / Sonic hedgehog 蛋白 (aa 198-462, His 标签)

人 MED19 基因全长ORF克隆

人 PC 基因全长ORF克隆

人 EIF5A2 基因全长ORF克隆

人 C1orf43 基因全长ORF克隆