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储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清
：使用不含热原和内毒素的试管
，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离

。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液
：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆
：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存

：如果样本收集后不及时检测
，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻
。

参数规格：

​
使用方法:
一
、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA
。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行
，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）
。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5
，4，3
，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注

：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟
，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中
，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头
，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步）
，每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线
。 
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)
、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)
，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液

，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒
。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号
。报告基团
：设置为FAM
。淬灭基团：NONE
，请勿选择ROX参比荧光。

5-(2-氯)1H-四唑：180.595 -（2 -氯）1H四唑
：50907-46-5 C7H5ClN4

亚硝酸钾：85.1Potassium nitrite：7758-09-0 KNO2

(铜试剂)二乙二硫代甲钠(copper reagent) two ethyl two sodium benzoate
：171.26 C5H10NNaS2
：148-18-5

3-三氟甲氧溴
：241.013- three - methoxy fluoride
：2252-44-0 C7H4BrF3O

2,2,5,5-四甲-4--3-咪唑啉-3-氧物-1-氧
：233.29Four 2,2,5,5- methyl -4- phenyl -3- imidazoline -3- oxide -1- oxygen radical
：18796-03-7 C13H17N2O2

2-溴-5-甲-1,3,4-噻二唑
：2- methyl -1,3,4- two：54044-79-0 C3H3BrN2S

硫丙磷亚砜
：338.45Sulfur and phosphorus：34643-47-5 C12H19O3PS3

3,3'-二硝二砜：308.273,3'- two nitro two benzene：1228-53-1 C12H8N2O6S

硫剂HVA-2（PDM）HVA-2 (PDM)：268.23 C14H8N2O4：3006-93-7

瘰疬分枝杆菌LAMP试剂盒大鼠 IL7 基因全长ORF克隆

大鼠 EIF1AX 基因全长ORF克隆

大鼠 NGP 基因全长ORF克隆

人 CYP11A1 基因全长ORF克隆

人 TEX264 基因全长ORF克隆

人 WFIKKN2 / GASP-1 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 IL6ST / gp130 / CD130 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 基因全长ORF克隆

小鼠 ATPIF1 基因全长ORF克隆

人 LPCAT2 基因全长ORF克隆

人 TETHERIN / BST2 / CD317 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 TMEM27 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)