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        禽传染性支气管炎病毒流行株RT-LAMP试剂盒

        产品名称:禽传染性支气管炎病毒流行株RT-LAMP试剂盒

        产品特点 :禽传染性支气管炎病毒流行株RT-LAMP试剂盒上海242net必赢生物相关产品:Acetylaconitin 77181-26-1 20mg 订购|咨询

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        产品型号 :50次

        更新日期  :2021-03-03

        访问次数:584

        50次禽传染性支气管炎病毒流行株RT-LAMP试剂盒的详细资料:

        储存条件 :
        仅用于科研14℃或-20℃样品收集  、处理及保存方法
        1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管 ,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后 ,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
        2. 血浆 :EDTA 、柠檬酸盐或肝素抗凝 。3000 转离心30 分钟取上清。
        3. 细胞上清液 :3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物 。
        4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎 。3000 转离心10 分钟取上清 。
        5. 保存:如果样本收集后不及时检测 ,请按一次用量分装 ,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

        参数规格 :

        产品名称

        禽传染性支气管炎病毒流行株RT-LAMP试剂盒

        英文名称

         RT-LAMP kit for avian infectious bronchitis virus epidemic strain

        规格

        50次


        使用方法:
        一、样品 DNA 的制备
        用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA ,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
        二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原 ,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
        1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5 ,4 ,3,2 和 1 号。
        2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同) 。
        3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL ,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
        4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得) ,充分震荡 1 分钟 ,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
        5. 换枪头 ,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟 ,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
        6. 换枪头 ,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照 。
        7. NC 管中不加任何阳性对照。
        8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步) ,每个样品做 3 次重复 。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴  ,绘制标准曲线。 
        检测步骤:
        一、 试剂的准备
        从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
        设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表 :
        试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
        荧光PCR反应液 14µL N×14µL
        酶混合物 1 µL N×1 µL
        总量 15 µL N×15µL
        1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液 ,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒 。
        7.2 qPCR反应条件
        将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内 。
        循环条件:
        1循环 50℃ for 2 min
        预变性 1循环 95℃ for 10 min
        PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
        60℃ for 60 sec
        60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。

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        小鼠 SEMA3A 基因全长ORF克隆

        大鼠 PDIA3 基因全长ORF克隆

        PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

        ZFP42 基因全长ORF克隆

        4-1BB / CD137 / TNFRSF9 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

        重组人 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白

        CD7 ELISA配对抗体

        ILKAP 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

        小鼠 ITGAV 基因全长ORF克隆

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