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NFκB DRGelisa试剂盒品牌服务承诺：
一、质量保证,有问题免费包换
；
二

、提供免费代测服务（为客户提供来样检测服务,zui大限度实验结果的有效性）；
三、提供全程技术指导
。

人核转录因子κB（NFκB）DRGelisa试剂盒 Human NFκB ELISA Kit
NFκB DRGelisa试剂盒品牌【实验用途】NF-kB，是一种蛋白质分子，其结构为一种体内的生物诱导分子(biological trigger)，是在体內許多疾病的生理作用上扮演了重要的角色，从癌症到骨质疏松症
，再到细菌感染
，皆与之脫离不了关系，NF-kB发现与哺乳动物的细胞，平时结合与另一分子--IkB，IkB使得NF-kB分子失去生物活性，当一组启动信号启动NF-kB后
，IkB脱离NF-kB，NF-kB恢復活性

，进入细胞核
。NF-kB位于TLR下游信号通路的枢纽位置，当细胞受到生物应激刺激后激活NF-kB
，活化的NF-kB进入细胞核调节炎性细胞因子的表达
，启动针对病原微生物的固有免疫和获得性免疫。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体，经（biotin）标记。样品和标记抗体先后加入酶标板孔反应后
，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应
；经过PBS或TBS的*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关

。
试剂盒组成及试剂配制

：
1.NFκB DRGelisa试剂盒品牌 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。 
2. 标准品（Standard）
：2瓶（冻干品）
。
3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶
4. 标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶
。
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）
：1×10ml/瓶。
6. 标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8. 底物溶液（TMB Substrate）
：1×10ml/瓶。 
9. 浓洗涤液（Wash Buffer）
：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 
10. 终止液（Stop Solution）

：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
​
操作流程：
（1）NFκB DRGelisa试剂盒品牌待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。 
（2）酶标板置4℃
，包被过夜
。
（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后
，即甩去）
，之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干
。重复洗涤3-4次
。
（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl
，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl

。 
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）
。 
（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min
。 
（9）洗板，同（4）
。 
（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s
，置37℃暗处反应15-20min
。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 
（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2
，终测得的OD值为两者之差（W1-W2）
，以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
（13）数据处理
：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值
。S/N≥2.1为阳性判定标准

。
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