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细胞简介：

作为哺乳动物的器官，不仅是 T细胞分化
、发育、成熟，同时向外周T细胞库输出T细胞的场所。的结构表面有结缔组织被摸，结缔组织伸入实质把分成许多不分隔的小叶。其中，结缔组织是由成纤维细胞构成，对中的其他细胞起到保护和支持作用。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常组织。

2)细胞鉴定
：波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、

、酵母和。

5)细胞生长方式：长梭形状细胞，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基
：

242net必赢推荐使用 Delf 原代基质 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养

；二、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担

。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象

。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养


。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系
，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

细胞蛋白磷酸酶2A（ PP2A）活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒

寡核苷酸探针非位素HRP－DAB显色法DNA南方杂交印迹试剂盒

绵羊环磷酸鸟苷(cGMP)elisa分析检测试剂盒

E测试盒

小鼠甲基化酶(Methylase)elisa检测试剂盒

小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)elisa检测试剂盒

寡核苷酸探针非位素AP化学发光法RNA北方杂交试剂盒

细胞PDGF-A蛋白表达比色法定量检测试剂盒

蛋白银染试剂盒 20T

有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白2抗体 Mad2L2

基因蛋白4抗体 REG4

非典型趋化因子受体3抗体 ACKR3

富含亮跨膜纤连蛋白3抗体 FLRT3

G蛋白偶联受体77抗体 GPR77

Hermansky-Pudlak综合征蛋白1抗体 HPS1

鸟核苷酸交换因子4 Epac2

平滑肌蛋白3抗体 Leiomodin-3

AF750标记的Ki67蛋白抗体 Ki-67, Alexa Flour 750 conjugated

APC-Cy7标记人CD13单克隆抗体 human CD13/APC-Cy7

精子发生相关蛋白2样蛋白抗体 SPATA2L

卷曲螺旋结构域蛋白87抗体 CCDC87

TBC结构域TB10A蛋白抗体 TBC1D10A

T细胞膜蛋白4抗体 TIM4

唾液酸结合性球蛋白样凝集素5抗体 SIGLEC5

细胞间粘附分子非整合素蛋白3抗体 DC-SIGN

小鼠α1抗胰AACT)elisa检测试剂盒

大鼠20S蛋白酶体(20SP)elisa生化检测试剂盒

20SP ELISA kit

人钙蛋白酶抑制蛋白(CAST)elisa生化检测试剂盒

大鼠胸腺基质细胞HumanCASTELISAkit