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细胞简介：

胆脂瘤是一种良性鳞状上皮角质化增生性病变，由鳞状层状角质化上皮细胞组成，它表现为一种含有成纤维细胞核炎性细胞的表皮囊肿，由囊内容物、基质、基质外层三部分构成。

其中，囊内容物是由分化的角化上皮组成


，基质包括形成囊壁结构的角化鳞状上皮
，基质外层或固有层是胆脂瘤外周部分


，由肉芽组成
。中耳胆脂瘤具有过度增殖能力
，炎症可能是角质化细胞过度增殖的原因之一
。

细胞特性：

1）细胞来源于术后人的胆脂瘤组织

。

2）细胞鉴定：广谱角蛋白((Pan Cytokeratin)荧光染色为阳性。

3）经鉴定细胞纯度高于90%。

4）不含有 HIV-1、 HBV
、HCV、支原体、、酵母和

。

5）细胞生长方式：上皮样细胞，贴壁培养。

推荐培养基
：

242net必赢推荐使用 delf原代 肿瘤 细胞培养体系 作为该细胞的培养基。

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜

；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照

。

公司正在出售的产品
：

大鼠血管内皮生长因子B(VEGFB)检测试剂盒
，英文名

： VEGFB ELISA Kit

Mouse iact parathyroid hormone (i-PTH) ELISA Kit 小鼠全段甲状旁腺素(i-PTH)检测试剂盒

Mousesolubleierleukin-2receptor,IL-2sRβELISAkit 小鼠白介素2可溶性受体β链(IL-2sRβ)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforhumanAzidothymidine,AZTELISAKit人

细胞EPHA3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitPKB大鼠蛋白激酶B

SELL重组食蟹猴 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 Protein

MBP (Myelin Basic Protein, Rat 0.5mgMBP (Myelin Basic Protein, Rat)peptide 髓鞘碱性蛋白(多肽)大鼠

IFNL1重组人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白 Protein

ERN1 Protein Human 重组人 ERN1 / IRE1 蛋白 (aa 465-977)

APOA1 Protein Mouse 重组小鼠 ApoA1 蛋白

MBP (Myelin Basic Protein, Rat 0.5mgMBP (Myelin Basic Protein, Rat)peptide 髓鞘碱性蛋白(多肽)大鼠

ERN1 Protein Human 重组人 ERN1 / IRE1 蛋白 (aa 465-977)

SELL重组食蟹猴 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 Protein

APOA1 Protein Mouse 重组小鼠 ApoA1 蛋白

IFNL1重组人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白 Protein

小鼠坏死因子相关凋亡诱导配体4(AIL-R4)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai myocardial aibody (AMA) ELISA Kit 人抗心肌抗体(AMA)检测试剂盒

HumanCyclophosphamide,CTXELISAKit 人对环0酰胺(CTX)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforACA/CENP(HumanAicenomereAibody)ELISAKit人抗着丝点抗体

一步法-PCR试剂盒20/50次

MouseOsteocalcin/Boneglaprotein,OT/BGPELISAKit小鼠骨钙素/骨谷蛋白(OT/BGP)检测试剂盒规格：96T/48T

人胆脂瘤细胞小鼠白介素 -5 (mouse IL-5)   作用
：   ELISA   规格：   96T   美国 Biosesource

小鼠白介素 -6 (mouse IL-6)   作用
：   ELISA   规格
：   96T   法国 Diaclone

小鼠白介素 -7(mouse IL-7)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D

小鼠白介素 -10 (mouse IL-10)   作用：   ELISA   规格
：   96T   法国 Diaclone

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液

、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。