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细胞简介：

肝门静脉是一种汇集，在肝门的入口处的一条大静脉

，两端连接的都是一些。其作用是将小肠吸收的营养物质运送到肝脏进行，是由静脉到静脉的血管。

肝门静脉的外膜由结缔组织组成，结缔组织主要由成纤维细胞构成。

细胞特性
：

1）组织来源于人的术后肝门静脉组织。

2)细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV、支原体、

、酵母和。

5)细胞生长方式
：长梭形细胞，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基：

242net必赢推荐使用 delf原代 成纤维 细胞培养体系 作为该细胞的培养基
。

实验报告：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

大鼠Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)检测试剂盒 ，英文名： Col Ⅱ ELISA Kit

Mouse erythropoietin (EPO) ELISA Kit 小鼠红细胞生成素(EPO)检测试剂盒

MouseOsteoprotegerinLigand,OPGLELISAKit 小鼠骨保护素配体(OPGL)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforHumansreumalbumin,HSAELISAKit人血清白蛋白

通用型野油菜黄单胞万年青致病变种(Xahomonascampesispv.dieffenbachiae;Xcd)试剂盒20次

ELISAKitPGE2大鼠前列腺素E2

IL1B重组大鼠 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (mature form) Protein

HER2 receptor(erbB-2 isoform 2 0.5mgHER2 receptor(erbB-2 isoform 2) c-erbB-2受体抗原

ECE2重组人 ECE-2 蛋白 (His 标签) Protein

FGF17 Protein Human 重组人 FGF17 蛋白

CD59A Protein Mouse 重组小鼠 CD59a / Protectin / MAC-IP 蛋白 (His 标签)

HER2 receptor(erbB-2 isoform 2 0.5mgHER2 receptor(erbB-2 isoform 2) c-erbB-2受体抗原

FGF17 Protein Human 重组人 FGF17 蛋白

IL1B重组大鼠 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (mature form) Protein

CD59A Protein Mouse 重组小鼠 CD59a / Protectin / MAC-IP 蛋白 (His 标签)

ECE2重组人 ECE-2 蛋白 (His 标签) Protein

小鼠低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)ELISA 试剂盒

Rat brain derived neuroophic factor (BDNF) ELISA Kit 大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)检测试剂盒

Humanpapillomavirus,HPVELISAKit 人状瘤病毒抗体(HPV)检测试剂盒 进口分装

HumanAspaateaminoansferase,AST检测试剂盒人天门冬氨基转移酶(AST)检测试剂盒

植物源性食品芹菜(cellery)试剂盒20次

Humahymidylatesyhetase,TSELISAKit人胸苷酸合成酶(TS)检测试剂盒

人肝门静脉成纤维细胞无菌甘油   100ml

Glycerol,Sterile   5x100ml

甘油0酸   10g

Glycero-phosphate,disodiumsalt   50g

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。