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细胞简介：

黑色素细胞是一种皮肤里的特殊的细胞，它产生黑色素
，传递给周围的角质形成细胞
。黑色素停留在这些角质形成细胞的细胞核上起保护作用
，防止染色体受到光线辐射受损。

在正常人体表皮中
，一个黑色素细胞大约可以顾及 40个角质形成细胞，称为表皮的黑色素形成单位。皮肤的颜色来自于角质形成细胞内存储的黑色素。一般来讲，存储黑色素多的人肤色更深
，也更受到保护，远离阳光辐射
。

细胞特性：

1）细胞来源于手术切除的皮肤组织。

2)不含有 HIV-1

、 HBV、HCV

、支原体、
、酵母和

。

3)细胞生长方式
：梭形细胞

，贴壁培养
。

推荐培养基
：

242net必赢推荐使用 delf 原代 黑色素 细胞培养体系 作为体外培养原代肠微血管内皮细胞的培养基。

实验报告：

一

、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3

、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液

，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二

、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠α干扰素(IFN-α)检测试剂盒 ，英文名： IFN-α ELISA Kit

Mouse endothelin (Big ET) ELISA Kit 小鼠大内皮素(Big ET)检测试剂盒

ELISA 小鼠6-酮-前列腺素F1a(mouse 6-k-PGF1a)  进口分装

CLIAKitforIgH(Humanimmunoglobulinheavychain)ELISAKit重链

通用型牛副流感(PIV)试剂盒20次

ELISAKitcTn-Ⅰ大鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ

CDH13重组大鼠 CDH13 / Cadherin-13 / H Cadherin 蛋白  Protein

Cytochrome C (抗原 0.5mgCytochrome C (抗原)

SERPINB6重组人 SerpinB6 / PI-6 蛋白 (His 标签) Protein

FGFR1 Protein Human 重组人 FGFR1 / CD331 蛋白 (His & GST 标签)

IL7R Protein Mouse 重组小鼠 IL7RA / CD127 蛋白 (His 标签)

Cytochrome C (抗原 0.5mgCytochrome C (抗原)

FGFR1 Protein Human 重组人 FGFR1 / CD331 蛋白 (His & GST 标签)

CDH13重组大鼠 CDH13 / Cadherin-13 / H Cadherin 蛋白  Protein

IL7R Protein Mouse 重组小鼠 IL7RA / CD127 蛋白 (His 标签)

SERPINB6重组人 SerpinB6 / PI-6 蛋白 (His 标签) Protein

小鼠酯转移蛋白(CETP)ELISA 试剂盒

Rat coagulation factor II (F II) ELISA Kit 大鼠Ⅱ(FⅡ)检测试剂盒

Humahrombieceptor,ELISAKit 人受体()检测试剂盒 进口分装

HumanaoaibodiesagainsttheC-terminaldomainⅣ,ACAST-DⅣ检测试剂盒人抗钙蛋白酶抑素抗体(ACAST-DⅣ)ELISAit

植物源性食品芝麻(sesame)试剂盒20次

Humahrombihrombomodulincompound,T-TMELISAKit人血栓调节蛋白复合物(T-TM)检测试剂盒

人黑色素细胞微晶纤维素   50g

Cellulose,Microcrystalline   100g

头孢苄   1g

Cephalexinmonohydrate   5g