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细胞简介：

树突状细胞（ Dendritic cells, DC）是机体功能强的专职抗原递呈细胞
，它能高效地摄取
、加工处理和递呈抗原
，未成熟DC具有较强的迁移能力
，成熟DC能有效激活初始型T细胞，处于启动、调控、并维持应答的中心环节。

DC的来源有两条途径：①髓样干细胞在GM-CSF的刺激下分化为DC
，称为髓样DC，也称DCl
，与单核细胞和粒细胞有共同的前体细胞
；包括朗格汉斯细胞
，间皮（或真皮）DCs以及单核细胞衍生的DCs等

，②来源于样干细胞，称为样DC或浆细胞样DC，即DC2
，与T细胞和NK细胞有共同的前体细胞

。

树突状细胞 (DC)表面具有丰富的抗原递呈分子、共刺激因子和粘附因子，是功能强大的专职抗原递呈细胞(APC)。DC自身具有刺激能力，是目前发现的惟一能激活未致敏的初始型T细胞的APC。

细胞特性：

1）细胞来源于脐血


。

2)细胞鉴定
：CD11c荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：半悬浮细胞
。

推荐培养基：

242net必赢推荐使用 Delf原代 树突状（ DC） 细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因

，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品
：

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