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细胞简介：

小肠位于腹中
，上端接幽门与胃相通，下端通过阑门与大肠相连，是食物消化吸收的主要场所。一般根据形态和结构变化将小肠分为三段
，分别为十二指肠，空肠和回肠。

小肠壁结构一般分 4层

，由外向内依次为：浆膜层
，平滑肌层，粘膜下层和粘膜层
。粘膜层又分为3层
：靠近粘膜下层的是一层平滑肌
，称为粘膜肌层。其次为结缔组织
，又称为固有层。后面向肠腔的是一层柱状上皮细胞构成的粘膜。

小肠粘膜有纵行和横行皱襞，并有无数细小的指状突起
，称为绒毛。绒毛的基底处粘膜内陷成管状，称为利贝屈恩氏隐窝。隐窝基底部的上皮细胞不断地进行有丝分裂，产生新细胞。隐窝上皮中还有许多杯状细胞，它分泌粘液
，起滑润食物和保护粘膜的作用。

细胞特性：

1）细胞来源于人正常小肠组织
。

2)细胞鉴定
：广谱角蛋白（PCK）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1、 HBV

、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：上皮样，多角形细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

242net必赢推荐使用 Delf原代上皮细胞培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小

；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6

、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠乙酰（Ach）elisa检测试剂盒

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嗅觉受体5K4抗体 OR5K4

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KIAA1731蛋白抗体

KIAA1731

趋化因子受体D6抗体

人小肠粘膜上皮细胞Chemokine Receptor D6

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书

，了解细胞相关信息

，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。