242net必赢

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液

，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

膀胱壁由三层组织组成，由内外为粘膜层
、肌层和外膜
。其中，粘膜层为极薄的一层移行上皮组织，和输尿管及尿道黏膜彼此连贯。体外培养膀胱上皮细胞不仅为组织工程膀胱，尿道提供种植细胞的必要手段，也是研究移行上皮细胞肿瘤发生和的基础与前提
。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常膀胱组织。

2)细胞鉴定：广谱角蛋白(PCK)荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV

、HCV、支原体、、酵母和

。

5)细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养
。

推荐培养基
：

242net必赢推荐使用 DELF 原代 上皮 细 胞培养体系 作为体外培养的培养基。

公司正在出售的产品：

鱼胰岛素(INS)elisa检测试剂盒免费代测

小鼠三磷酸酶(ITPA)elisa检测试剂盒

大鼠阿立新A(Orexin A)elisa分析检测试剂盒

血液S-腺苷甲硫（SAM或AdoMet）酶连续循环比色法定量检测试剂盒

人SPARC相关模块化钙结合蛋白2(SMOC2)elisa检测试剂盒

组织半胱-10（CASPASE-10）活性荧光定量检测试剂盒

人HSP60 IgG抗体elisa分析检测试剂盒

大鼠toll样受体3(TLR3)elisa检测试剂盒

小鼠绒毛膜促性腺β(β-CG)elisa分析检测试剂盒

四分子交联体3/四旋蛋白3/四次跨膜蛋白3抗体 TSPAN3

糖蛋白P43抗体 RBMX/hnRNP G

Prader-Willi综合征相关蛋白抗体 FSD2

RasGTP酶激活蛋白IQGAP3抗体 IQGAP3

2’,3’-环腺苷酸-3’-磷酸二酯酶抗体 CNPase

3号染色体开放阅读框36抗体 C3orf36

肌球蛋白1E抗体 MYO1E

畸胎瘤衍化生长因子单克隆抗体 CRIPTO

血管内皮生长因子受体1抗体 VEGFR1

岩藻糖转移酶1抗体 FUT1

蛋白酶体复合物C5抗体 PRPS1L1

凋亡相关蛋白1抗体 RYBP

Fcγ球蛋白IgG结合蛋白抗体 FCGBP

FITC标记小鼠CD49b单克隆抗体 mouse CD49b/FITC

磷脂酰肌醇激酶（PI3Kβ）抗体 PI3 Kinase p110 beta

钠离子通道β1抗体 SCN1B

即用型正常兔血清 100ml

低分子质量蛋白2抗体

LMP2

趋化因子CXCL15抗体

兔膀胱上皮细胞CXCL15

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养

。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。