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实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3

、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后

，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介：

集合管是由皮质走向髓质椎体孔的小管，沿途有许多肾单位的远曲小管与之相连
，管径逐渐变粗，管壁逐渐变厚，管壁由柱状上皮构成。集合管流的是小管液
，肾脏血液经肾小球滤过，形成的原尿
，进入肾小管后就称为小管液
，小管液流向集合管进一步滤过和重吸收形成终尿。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常肾脏组织。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18（CK-18）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%

。

4)不含有 HIV-1

、 HBV、HCV、支原体
、
、酵母和。

5)细胞生长方式
：铺路石状细胞
，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基
：

242net必赢推荐使用 DELF 原代上皮细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

公司正在出售的产品
：

兔超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA 试剂盒

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兔肾集合管上皮细胞猪Ⅰ型前胶原羧基端肽检测试剂盒   猪Ⅰ型前胶原羧基端肽试剂盒   规格型号：96T/48T   猪Ⅰ型前胶原羧基端肽试剂盒，规格型号：96T/48T
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：6个月。

植物D2检测试剂盒   植物D2试剂盒   规格型号：96T/48T   植物D2试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装）
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：2-8℃   保质期：6个月
。

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。

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，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：人CD14分子试剂盒
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：6个月
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。