试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被乙酰羧化酶合成酶（ACC）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体 ，经过温育并*洗涤 。用底物TMB显色 ，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的乙酰羧化酶合成酶（ACC）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度 。
样品收集、处理及保存方法
1. 样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。
2. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。
3. 植物萃取液或其它相关样本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测。
4. 保存 ：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
植物乙酰羧化酶合成酶（ACC）ELISA试剂盒操作注意事项
试剂盒保存在2-8℃ ，使用前室温平衡20分钟 。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象 ，水浴加热使结晶*溶解后再使用 。
实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，zui终结果乘以5才是样本实际浓度。
严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
注 ：标准品（S0-S5）浓度依次为 ：0、1 、2、4 、8、16 U/L
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释 ，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液 ，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次 。
操作步骤
从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃ 。
设置标准品孔和样本孔 ，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL ，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min 。
弃去液体 ，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液 ，静置1min ，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min 。
每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标 ，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
植物乙酰羧化酶合成酶（ACC）ELISA试剂盒试剂盒性能
1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2. 灵敏度 ：zui低检测浓度小于0.1 U/L 。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏：2-8℃ ，避光防潮保存 。
6. 有效期：6个月