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        ELISA试剂盒结果“花板”的问题
        点击次数:925 更新时间 :2016-04-21

           结果“花板”的问题对检测数据造成了很大影响,往往会使检测者做出误判,是实验中必须要注意和避免的。

           使用对血液HBsAg-HCV-HIV及梅毒等实验检测的结果中,空白和阴性,阳性对照以及室内质控孔结果正常 ,根据卫生部临检中心提供的数据,HBsAg0.5ng1ng-HCV-HIV梅毒正常范围均为2NCU,但血液标本孔的OD值比较高(大多数OD值≥0.070)。标本的阳性率很高,每板除对照孔外 ,有时阳性高达10孔之多 ,而大多数真阳性标本都出现弱阳性结果。

           针对这种“花板”现象242net必赢通过多次实验的分析和判断,总结了一些经验,分析如下:

          1 ELISA实验标本、试剂、仪器

          1.1 标本 出入境人员的血液标本。

          1.2 试剂 HBsAg、HCV 、HIV 、梅毒试剂均为不同的ELISA试剂盒。

          1.3 仪器 LD4-2型脑心机BID RAD1575型洗板机BID RAD550酶标仪  。

         2 方法

          所有被检出入境人员的血液标本,按照各个提供的ELISA试剂盒说明书进行HBsAg-HCV-HIV梅毒等检验项目操作。所有试剂均在有效期内使用 。

         3 结果

          所使用不同的试剂有时会出现“花板”问题 。

         4 分析

          在所有标本进行检测的过程中,所用的仪器及加样过程都处于正常状态的情况下 ,步骤均按照各种试剂说明书的要求去做,排除实验所用仪器和操作步骤对实验结果的影响外,ELISA试剂盒内的空白 、阴性和阳性对照以及室内质控值都很正常,只有检测的血液标本情况异常 。根据国家和疾控中心报告阳性率的比例不应该是很高的情况下 ,HBsAg在用ELISA之前都经过了快速金标试剂的检测,阳性标本得到了一定的控制。因此  ,原因可能是在标本的处理,特别是放置时间 、离心速度和离心时间方面的问题 。所以,标本的处理就成为实验结果的主要可疑因素。

          为了避免“花板”现象的出现 ,降低检测的假阳性率,获取准确的实验结果,应选择灵敏度高 、特异性好、稳定性好 、批间差小 、操作方便省时的ELISA试剂。

         实验过程中应该注意的问题:

          (1)抽取样本时应抽出足够检验量的血液标本,按比例加抗凝剂,便于离心 ,得到足够的血清(血浆)。

          (2)血液标本应置于室温下1~2h,使血液凝固收缩,然后离心检测或让血液过夜后再检测。这样才能使得血液充分收缩,让标本中的非特异性物质所致的假阳性率降至zui低。

          (3)检测之前,加大离心转速,尽量延长时间 ,使血细胞和纤维蛋白充分沉淀,让血细胞与血清*分离 。

          (4)加样时不能加入红细胞或纤维蛋白 ,要按照操作说明书去做 ,否则会影响实验结果 。

          (5)封板温育时,各孔一定要封严  ,防止阳性标本的液体蒸发,产生周边现象从而导致“花板”的出现。

          (6)手工洗板时应注意液体被溅出或孔与孔之间的液体溢出 ,连成整体液面后产生“花板”。用洗板机洗板时应防止针口有纤维蛋白或异物 ,这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板”的出现 。

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