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        PrimaCell™大鼠肾小球内皮细胞试剂盒细胞培养方法
        点击次数:663 更新时间:2021-06-17

        细胞培养方法;
        1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
        ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
        ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿 ,盖好放入培养箱消化 ;
        ③1-2min后 ,显微镜下观察细胞 ,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落 ,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
        ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min ,弃上清;
        ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基 ;
        ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中 。
        2、细胞复苏:
        ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右 ,加入4-5ml培养基混匀。
        ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀 ,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
        3 、细胞冻存 :待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
        ①弃去培养上清 ,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
        ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;
        ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
        ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

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