操作步骤
1. 标准品的稀释 ： 本试剂盒提供原倍标准品一支， 用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
100pg/ml 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
50pg/ml 4 号标准品 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
25pg/ml 3 号标准品 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
12.5pg/ml 2 号标准品 150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
6.25pg/ml 1 号标准品 150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
2. 加样 ：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准孔、待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样 50μl ， 待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品zui终稀释度为 5 倍） 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀 。
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟 。
4. 配液 ：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜 ，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液 ，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次 ，拍干。
6. 加酶 ：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀 ，37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止 ：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
计算：
以标准物的浓度为横坐标 ，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线 ，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数 ；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式， 将样品的 OD 值代入方程式， 计算出样品浓度， 再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
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