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操作步骤
1. 标准品的稀释
：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释
。
2000 ng/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
1000 ng/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
500 ng/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
250 ng/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
125 ng/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，
然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5 倍）
。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁
，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液
：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜
，弃去液体，甩干
，每孔加满洗涤液

，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干
。
6. 加酶
：每孔加入酶标试剂50μl
，空白孔除外
。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl
，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止
：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）
。 测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。

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