ELISA试剂盒HRP的制备方法
1).硫酸铵分级分离：在不断搅拌下 ，每1000mL滤液中慢慢加入226g硫酸铵粉末(相当于0.40饱和度，0℃)，大约在1~2h内加完 ，置冷室中放置过一夜 。次日将上清液小心地用虹吸管移出，下面混浊液以3 000r/min离心15min ，弃沉淀，合并上清液。再按每1000mL上清液加258g硫酸铵粉末(0.8饱和度)随加随搅拌，当硫酸铵全部溶解后 ，置冷室过一夜。次日 ，虹吸出上清液，沉淀部分在冰冻离心机中以13000r/min离心20min，弃去上清液，收集沉淀。将沉淀悬浮于100~150mL蒸馏水中(加水量要使沉淀全部溶解为止)，分装于透析袋内，放在流动自来水中进行透析1～2天，直到硫酸铵透析完毕为止(可用5%乙酸钡溶液或奈氏试剂进行检查) 。然后改换成用蒸馏水透析，中间更换2~3次 ，用0.1mol/L溶液检查透析外液无氯离子为止。将透析液合并，在冰冻离心机中以4 000r/min离心15min，弃去沉淀，量上清液的体积。
2).丙酮分级分离：将上清液倒入烧杯并置冰盐浴中 ，在不断搅拌下，用细滴管沿杯壁加入1倍体积预冷至-15℃的丙酮，放置片刻，在冰冻离心机中以4000r/min离心15min，弃去沉淀 。上清液再加入0.8体积(按原上清液体积)-15℃丙酮，(操作同上) ，静置后，在冰冻离心机中离心收集沉淀 。将沉淀溶于少量蒸馏水中，透析除去丙酮 。可得RZ值近于1的酶溶液。
3).水提取：称取5kg用水冲刷干净的鲜辣根(辣根皮中亦含有丰富的HRP)，用菜刀切成小碎块 ，在绞肉机中绞碎1～2次 。碎渣浆用1倍体积的水低温下搅拌提取过一夜(亦可采用高速抽提法) 。次日用甩干机(或离心机)甩干，收集滤液，碎渣再用1/4倍体积水浸泡提取1次 ，合并2次滤液 ，测得总体积。
4).精制 ：将上步酶液适当稀释，滴加1mol/L硫酸锌溶液，使酶液中锌离子浓度为10 -3 mol/L ，5 000r/min离心10min ，得上清液。再将沉淀用少量蒸馏水洗涤 ，离心，洗液与清液合并 ，分装于透析袋内，用水透析除盐 ，用微孔滤膜过滤 ，进行真空冰冻干燥(约得20mg)，产品呈米黄色纤维状松软物，HRP产品的RZ值可达3.0左右，置真空干燥器中低温保存。
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