实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1. 大鼠A（CsA）ELISA试剂盒加样 ：分别设空白孔 、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl ，余孔加待测样品100μl ，注意不要有气泡 ，加样将样品加于酶标板孔底部 ，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG工作液
100μl（取1μl标记抗体加99μl标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃，60分钟 。
3. 温育60分钟后 ，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干 。
4. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见孔内有明显蓝色，即可终止）。
5. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同 。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
6. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
注 ：1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟 ，以便试剂集中到管底 。
2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内 ，酶标板加上盖或覆膜。
4. 未使用完的酶标板或者试剂，大鼠A（CsA）ELISA试剂盒请于2-8℃保存。辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG工作液。
5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。