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        VE Elisa Kit斑点免疫金银染色法实验原理
        点击次数 :983 更新时间:2017-02-14

        VE Elisa Kit斑点免疫金银染色法实验原理

        试剂及材料

        1. NC膜

        2. 20mol/L ,pH7.6 PBS

        3. BSA

        4. 定影液:20%。

        5. 电泳仪和电转仪

        6. 其它试剂同上

        操作方法

        1. 用微量加样器在NC膜上直接点样1-2ml(若抗原含量少 ,可重复点样),或经转移电泳将抗原吸附在NC膜上 ,自然干燥;

        2. 将点样后的NC膜浸入含5%BSA和0.05% NaN3的20mol/L,pH7.6 PBS内 ,37℃,30min,以封闭未饱和的蛋白质结合位点;

        3. 用含0.1%BSA的TBS洗三次 ,每次5min;滴加适当稀释的一抗(1-2mg/ml ,用含0.1%BSA和正常羊或兔血清的TBS稀释),阴性对照用稀释液代替抗体,在室温下 ,反应2h;

        4. 用含0.1%BSA的TBS洗三次,每次5min后,将NC膜浸入金标二抗溶液中(金标抗体用含0.4%明胶和0.1%BSA的TBS适当稀释)。反应时间视金标抗体的稀释度而定 :一般1:25稀释(OD520 nm值约为0.2),反应时间为2h;1:100-1:200稀释(OD520 nm值约为0.005),反应时间为16h;

        5. TBS冲洗 ,即可观察结果。此过程为dot-IGS 。

        6. 需要是可继续进行银显色反应,行dot-IGSS:将金标抗体染色后的NC膜,用TBS洗三次 ,每次5min,再用蒸馏水洗涤两次以去除Cl- ,浸入0.2mol/L,pH3.5枸橼酸缓冲液内2min;

        7. 移入银显色液中 ,避光显色5-10min后,再移入定影液中,定影5min;

        8. 自来水冲洗,自然干燥;

        结果观察

        dot-IGS :在NC膜上呈粉红色;dot-IGSS:在NC膜上呈棕黑色。

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