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关于ELISA试剂盒测抗原的竞争法
点击次数：1039 更新时间：2016-11-03
关于测抗原的竞争法
ELISA试剂盒当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应 。如抗原为高纯度的，可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质，直接包被不易成功 ，可采用捕获包被法 ，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应 。竞争法测抗体有多种模式 ，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，抗HBc ELISA一般采用此法 。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗体，与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。
实验步骤
1. 以稀释液将待检标本做适当稀释（预试中确定）加入包被有已知抗原的酶标板中（50ul/孔） ，加封口胶带于37℃作用30min 。
2. 弃反应液，以冲洗液连续洗板5次并于吸水纸上拍干。
3. 加入酶标抗体（浓度在预试中确定） 。加封口胶带后于37℃作用30min。
4. 重复第2步 。
5. 加底物（浓度在预试中确定），加封口胶带后于室温下避光作用5-60 min，其间不时观察，显色满意后加终止液50ul/孔。
6. 于酶标仪测定OD值 ，OPD用492nm测定，TMB用450nm测定。