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细胞感染有以下三种
点击次数：1878 更新时间：2016-09-12
细胞感染有以下三种 ：
（一）细胞准备
将状态良好的目的细胞接种到24孔板，使细胞浓度为 1×105/ml 细胞 ，接种细胞数量因细胞的生长速度而略有不同， 一般是保证第二天进行病毒感染的时候细胞汇合率介于 50%至70%之间。
（二）病毒感染
1.感染细胞MOI 的测定MOI（Multiplicity of Infection，感染复数）是指每个细胞感染的病毒数，通常MOI 越高 ，病毒整合到染色体的数量以及目的蛋白的表达量越高。对于分裂活跃的细胞 ，比如 Hela 、293 细胞，MOI=1～3 时 ，80%以上的细胞均表达目的基因。而对于非分裂细胞，比如原代细胞 ，感染效率较低 。需要进行MOI梯度摸索实验，选择适合的MOI 进行实验。
2.感染步骤
按实验需要将细胞铺板（比如12孔板）；细胞数以第2天密度约50%为宜；37℃ 培养过夜。
对于Polybrene 可施加的细胞 ：准备*培养基和 Polybrene混合物 ，Polybrene 终浓度为摸索得到的zui适终浓度 。移去培养基并添加 0.5 ml Polybrene/培养基混合物于每孔中（适用于24 孔板，其他孔板请相应调整体）。
对于不适用 Polybrene 的细胞 ，以上步骤省略，直接进入下面步骤：
感染前 ，从冰箱取出并在 37℃水浴中快速融化病毒，吸去细胞原有培养基，将病毒原液加入细胞中 ，轻轻8字混匀。感染后第二天（约12小时），吸去含病毒的培养液 ，换上新鲜的*培养液 ，继续37℃培养。感染后48小时 ，对于带 GFP报告基因的病毒，可通过荧光显微镜观测GFP表达效率，对于携带 Puromycin抗性基因的病毒，换上含适当浓度的 Puromycin 的新鲜*培养液 ，筛选稳定转导的细胞株。