1．标本溶血 要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相 ，从而与后面加入的HRP底物反应显色。
2．标本被细菌污染 样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长 ，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用 ；二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的p—半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。
3．标本贮存时间过长 标本在2～8~C下保存时间过长 ，IgG可聚合成多聚体，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性 。血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8~C下保存1周，如为有菌操作，则建议冷冻保存 。样本的长时间保存 ，应在一70~C以下 。
4．标本凝固不全 血液采集后，如收集管中无促凝剂和抗凝剂 ，则血液通常在半小时后开始凝固，18～24h*凝固 。日常检验中，常在血液还未开始凝固时即离心分离血清 ，此时因血液没有*凝固，离出的“血清”并非为*的血清，其中仍残留部分纤维蛋白原，如将其加入微孔中，在ELISA测定过程中仍可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果 。因此，血液标本采集后，应使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的或于中加入适当的促凝剂。
5．冷冻保存标本避免反复冻融 冷冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融 。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果 。此外，冻融标本的混匀亦应注意 ，不要进行剧烈振荡 ，反复颠倒混匀即可。此外 ，标本在保存中如出现细菌污染所致的浑浊或絮状物时 ，应离心沉淀后取上清检测。