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错配修复基因超家族属于管家基因，目前已发现人类6个错配修复基因：hMSH2、hMSH3
、hMSH6
、hMLH1、hPMS1和hPMS2
。错配修复基因的异常表现为基因突变和蛋白质表达的减步，而蛋白质表达涉及RNA水平和蛋白质水平。下面就RNA水平作一简要阐述。

错配修复基因mRNA原位杂交：

【材料】

盖玻片、湿盒
、杂交炉
、PBS、SSC、预杂交液
、BcIP／NBT
。

【操作程序】

1．将细胞制成1~107／L细胞悬液，将细胞悬液一滴接种于已消毒培养皿中的盖玻片上，加培养基培养48小时。

2．将细胞生长状态良好的盖玻片取出0．01mol／L PBS漂洗3次，甲醇：丙酮(1
：1)固定液固定10分钟
，PBS漂洗3次。

3．将制好的细胞片用10mg／ml蛋白酶K消化
，37℃，10分钟
，PBS洗2次，每次2分钟。

4．取200μl预杂交液95℃变性10分钟，冰浴中骤冷
，加样于细胞标本上．平放入密封湿盒．42℃孵育3小时。

5．标记探针加于200μl预杂交液中，95℃变性10分钟，冰浴中骤冷，加样于细胞标本上
，平放入密封湿盒，42℃恒温过夜
。

6．依次用6 xSSC-45％甲酰胺洗10分钟，2×SSC洗10分钟×2次
，0．2xSSC洗10分钟×2次。

7．加碱性磷酸酶标记的抗体

，37℃，4小时。

8．洗脱液洗10分钟，加入BCIP／NBT显色。镜检显况，PBS冲洗

，终止显色。

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