操作步骤
1. 标准品的稀释与加样 ：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在di一 、第二孔中加标准品稀释液50μl ，混匀 ；然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三 、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别取50μl分别加到第七、第八孔中 ，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl ，混匀后从第七、第八孔中加到第五、第六孔中 ，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五 、第六孔中各分别取50μl加到第九 、第十孔中 ，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl ，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L） 。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、待测样品孔 。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍） 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育 ：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜 ，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次 ，拍干 。
6. 加酶 ：每孔加入酶标试剂50μl ，空白孔除外。
7. 温育：操作同3 。
8. 洗涤：操作同5 。
9. 显色 ：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止 ：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。
11. 测定 ：以空白空调零 ，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟。