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        小鼠脑肠肽elisa检测试剂盒样本实验前准备
        点击次数 :714 更新时间:2022-05-24

        样本实验前准备:

        ELISA试剂盒液体样本 :包括血清、血浆、尿液 、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

        (1)血清

        室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分) 。仔细收集上清 。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

        (2)血浆:

        应根据标本的要求选择EDTA 、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心 。

        (3)尿液:

        用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心 。胸腹水、脑脊液参照此实行。

        (4)细胞培养上清:

        检测分泌性的成份时 ,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。

        (5)培养细胞

        检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂 ,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分) 。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成 ,应再次离心 。

        (6)组织标本

        切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化 。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用 。

        结果计算与判断


        1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。


        2. 以标准品500、250 、125、62.5、31.2、15.6、7.8、0 ng/ml为横坐标 ,OD值为纵坐标 ,在坐标纸上作图,画出标准曲线。


        3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应AMA含量,再乘上稀释倍数即可 。


        试剂盒性能


          1.   灵敏度:最小的AMA 检测浓度小于4ng/ml 。


        2. 特异性:可同时检测重组或天然的小鼠AMA 。不与小鼠其它细胞因子有交叉反应。


        3. 重复性:板内、板见变异系数均小于11% 。


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